褪黑素及其受體激動劑對3T3-L1脂肪細胞胰島素抵抗的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：研究Mel及其受體激動劑Tal對FFA誘導(dǎo)的3T3-L1脂肪細胞胰島素抵抗相關(guān)蛋白IRS-1及其磷酸化蛋白（PS307）和GLUT-4表達以及葡萄糖攝取能力的影響。 方法：實驗分為三個部分： 第一部分是細胞的誘導(dǎo)分化，用經(jīng)典的“雞尾酒”法即IBMX、的塞米松和胰島素三聯(lián)培養(yǎng)誘導(dǎo)3T3-L1成纖維細胞分化成脂肪細胞，并用油紅O染色鑒定脂肪細胞形態(tài)。 第二部分是利用FFA誘導(dǎo)脂肪細胞的胰島素抵抗，檢測細胞葡萄糖

2、攝取能力，檢測IRS-1、PS307和GLUT-4蛋白質(zhì)表達，選擇有效的時間和濃度的FFA來處理細胞。 第三部分是檢測Mel及其受體激動劑Tal對FFA處理的3T3-L1脂肪細胞的葡萄糖攝取能力及其相關(guān)蛋白表達的影響。采用Western印跡分別檢測IRS-1、PS307和GLUT-4蛋白質(zhì)表達；采用液體閃爍法檢測細胞葡萄糖攝取能力。 結(jié)果：采用“雞尾酒”法誘導(dǎo)3T3-L1成纖維細胞10～12天以后， 90％分化成為脂肪細

3、胞，油紅O染色可見呈圓形，脂滴很多呈典型的“戒環(huán)樣”形態(tài)。用棕櫚酸誘導(dǎo)脂肪細胞發(fā)生胰島素抵抗，結(jié)果顯示6小時的棕櫚酸處理后，細胞的葡萄糖攝取能力明顯降低。對FFA處理的時效研究顯示6小時左右，胰島素信號通路的關(guān)鍵蛋白IRS-1的表達開始顯著下降，GLUT-4也下降約50％，對棕櫚酸處理的量效研究顯示，棕櫚酸在200μM左右可以促進IRS-1的磷酸化，300μM以后的增加不顯著。采用300μM濃度處理6小時來進行后續(xù)的研究，并在棕櫚酸處理

4、結(jié)束前1小時加入不同濃度Mel或其受體激動劑Tal，隨著Mel濃度的增加IRS-1的表達變化不顯著，而在高劑量組（>1nM）時，PS307/IRS-1的比值是不斷降低的，低劑量組有所回升（100pM與高劑量各組相比，P<0.05）,但是都要低于FFA單獨處理組。對Mel的受體激動劑Tal濃度效果的研究顯示其在10nM左右最佳。Mel可以提高FFA處理的3T3-L1脂肪細胞GLUT-4的表達和葡萄糖攝取，且Mel/Tal與胰島素合用時效果

5、更顯著。 結(jié)論：FFA可以降低胰島素誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的脂肪細胞葡萄糖攝取能力，可能是胰島素抵抗的病因之一。FFA通過降低胰島素信號通路中非常關(guān)鍵的IRS-1的表達，升高其絲氨酸307位點的磷酸化從而抑制正常的酪氨酸磷酸化使胰島素信號通路受阻。并且降低其下游的調(diào)節(jié)蛋白GLUT-4的表達，減少脂肪細胞葡萄糖的攝取。Mel可以干預(yù)FFA的作用，尤其是高濃度的Mel可以升高IRS-1的表達，減少其異位的磷酸化，并可以增加細胞的葡萄糖攝取能