mir-425對(duì)3T3-L1細(xì)胞分化的作用研究.pdf

1、近年來(lái)，大量的研究表明，miRNA在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，miRNA通過(guò)靶定與脂肪細(xì)胞分化相關(guān)的基因來(lái)調(diào)控脂肪細(xì)胞分化。對(duì)miRNA進(jìn)行序列保守性分析、靶基因預(yù)測(cè)和功能分析，從而選擇miR-425-5p為研究對(duì)象。本試驗(yàn)采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)、實(shí)時(shí)定量PCR(Q-PCR)、免疫印跡(Western blot)等方法對(duì)miR-425-5p的作用和功能進(jìn)行研究。主要的研究結(jié)果如下:
　　(1)經(jīng)miRBase網(wǎng)站對(duì)多

2、種物種的miR-425序列對(duì)比發(fā)現(xiàn)，包括豬在內(nèi)的多種哺乳動(dòng)物的miR-425-5p的成熟序列保守性很高，只有少許堿基不同，種子序列是完全相同的，保守性也很高。
　　(2)通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)miR-425-5p在5月齡大白豬心、肝、脾等多個(gè)組織中的表達(dá)量，結(jié)果顯示:miR-425-5p在大白豬中的脂肪組織中的表達(dá)量最高，并且在所有脂肪組織中在腹脂中的表達(dá)量最高。
　　(3)在3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中，miR-

3、425-5p的表達(dá)量先下降后上升。轉(zhuǎn)染miR-425-5p mimics和NC，miR-425-5p inhibitor和inhibitor NC到3T3-L1細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞分化8天，PPARγ、aP2和C/EBPα表達(dá)量明顯下調(diào)，油紅O染色也表明miR-425-5p減少脂滴的積累。另外，3T3-L1細(xì)胞試驗(yàn)組中，miR-425-5p明顯降低細(xì)胞中甘油三酯的含量。
　　(4)根據(jù)miR-425-5p與靶基因的3'UTR相對(duì)應(yīng)的結(jié)合

4、序列，構(gòu)建了野生型和突變型雙熒光素酶報(bào)告載體pmirGLO載體，并將這倆種質(zhì)粒分別于miR-425-5pmimics以及NC共轉(zhuǎn)染到BHK-21細(xì)胞中，檢測(cè)熒光活性。結(jié)果顯示，miR-425-5p能識(shí)別并結(jié)合Zfp423的3'UTR對(duì)應(yīng)序列。
　　(5)在3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中，Zfp423的表達(dá)量先上升后下降的。轉(zhuǎn)染miR-425-5p mimics和NC，miR-425-5p inhibitor和inhibitor