杜氏利什曼原蟲兩個發(fā)育階段基因表達(dá)系列分析文庫的構(gòu)建及HSP90在其階段轉(zhuǎn)變過程中的作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文杜氏利什曼原蟲兩個發(fā)育階段基因表達(dá)系列分析文庫的構(gòu)建及HSP90在其階段轉(zhuǎn)變過程中的作用姓名:李巧麗申請學(xué)位級別:博士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:喬中東20090105庫,只能檢測已知基因,不能發(fā)現(xiàn)未知基因。因此,本研究以體外培養(yǎng)的前鞭毛體及無鞭毛體為研究對象,引入基因表達(dá)系列分析的方法,建立這兩個發(fā)育階段基因表達(dá)系列分析文庫,希望為進(jìn)一步的探討其轉(zhuǎn)化機(jī)制,以及轉(zhuǎn)化過程與宿主的關(guān)系提供更多的線索。在以前的

2、研究中,研究者們報道了多種利什曼原蟲前鞭毛體的培養(yǎng)方法,簡單重復(fù)文獻(xiàn)中的培養(yǎng)方法沒有成功得到杜氏利什曼原蟲MHOM/CN/Gansu8801種的無鞭毛體,總結(jié)后我們發(fā)現(xiàn)不同種的利什曼原蟲其前鞭毛體的培養(yǎng)步驟和培養(yǎng)條件均有所不同。因此,在本研究中我們首先改進(jìn)了杜氏利什曼原蟲MHOM/CN/Gansu8801種無外源細(xì)胞污染的無鞭毛體體外培養(yǎng)的方法,得到了大量的無鞭毛體供后續(xù)研究。接下來,我們應(yīng)用基因表達(dá)系列分析(Serialanalysi

3、sofgeneexpression,SAGE)的方法建立了杜氏利什曼原蟲前鞭毛體及無鞭毛體兩個發(fā)育階段基因表達(dá)文庫。一共獲得總標(biāo)簽數(shù)為40,431個,在前鞭毛體文庫和無鞭毛體文庫中分別為20,299和20,132個標(biāo)簽。大約89%的基因在兩個文庫中均有表達(dá),有968個基因的表達(dá)水平在兩個文庫之間有顯著性差異。其中,326個基因在無鞭毛體文庫中是表達(dá)下調(diào)的,642個基因表達(dá)上調(diào)。我們選取了兩個文庫中表達(dá)差異較大的標(biāo)簽,BLAST查找比對找

4、到28個標(biāo)簽與其對應(yīng)的基因,這其中包括histone4,elongationfactor1alpha,alphatubulin,acidicribosomalprotein,LACK,ubiquitin—fusionprotein,40SribosomalproteinS2,40Sribosomalprotein$33,60Sribosomalprotein121,60SribosomalproteinL28等基兇。在這其中,延長因子1

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