重組人腫瘤壞死因子α（rhTNFα）的鑒定、表達及大規(guī)模提取的研究.pdf

1、該論文是該實驗室用大腸桿菌表達重組人腫瘤壞死因子的中試生產(chǎn)工藝的一部分.論文重點對重組人腫瘤壞死因子的基因鑒定、克隆表達，目標蛋白的釋放和初提取進行了研究.由于該實驗室的E.ColiBL21菌種保存時間過長，需要對質(zhì)粒進行鑒定.首先提取pTNF320質(zhì)粒，切下其中的TNFcDNA片段，插入到克隆載體pUC19上測序，根據(jù)測序結(jié)果翻譯到氨基酸序列，同文獻中的TNF氨基酸序列進行了比較，兩者序列完全一致，表明此工程菌可用，然后將pTNF32

2、0質(zhì)粒轉(zhuǎn)化新鮮的宿主菌E.ColiBL21進行目標產(chǎn)物的表達.另外，該實驗針對珠磨破碎動力學進行了研究，分別考察了間歇破碎、連續(xù)破碎動力學，研究了蛋白釋放率與細胞破碎之間的關(guān)系，比較了連續(xù)破碎、間歇破碎及超聲破碎的的破碎效果.論文還研究了高流量多循環(huán)對細胞破效果的影響，考察了不同操作條件下的能量利用率.最后根據(jù)TNF的耐溫特性，集成60℃熱變性除雜蛋白及隨后的硫銨沉淀，考察了不同組合集成路線對TNF初提取的影響，得出了一條最佳工藝路線.