弓形蟲緩殖子期特異性抗原的基因克隆、蛋白表達及重組BAG1抗原的初步應(yīng)用.pdf

1、南方醫(yī)科大學碩士學位論文弓形蟲緩殖子期特異性抗原的基因克隆、蛋白表達及重組BAG1抗原的初步應(yīng)用姓名：王瓊申請學位級別：碩士專業(yè)：病原生物學指導教師：陳曉光20070524中文摘要者重視，一些緩殖子及包囊特有的蛋白的基因也已被克隆、鑒定。本研究對緩殖子期特異性抗原BAGI與SAG4進行基因克隆、蛋白表達以及對重組抗原的免疫反應(yīng)性進行分析；進一步優(yōu)化蛋白的表達條件，純化表達蛋白以獲得大量高純度的重組蛋白，為進一步的研究創(chuàng)造了條件。并且探討

2、重組抗原作為新型診斷抗原的可能性；進一步篩選、鑒定針對重組BAGI的單克隆抗體，為弓形蟲緩殖子的進一步研究打下基礎(chǔ)。彝的：1克隆與表達弓形蟲緩殖子期特異抗原BAGI、SAG4的基因，并分析重組表達抗原的免疫反應(yīng)性；2純化表達蛋白，獲取大量高純度的重組抗原，探討重組抗原在弓形蟲病診斷上的應(yīng)用；3制備、鑒定抗重組BAGI的單克隆抗體，為弓形蟲緩殖予的進一步研究打下基礎(chǔ)。方法：1誘導體外培養(yǎng)的陰株弓形蟲速殖子向緩殖子轉(zhuǎn)化，采用RT—PCR從緩

3、殖子中擴增BAGl基因片段；采用PCR從弓形蟲基因組DNA中擴增SAG4基因片段；2利用酶切、連接反應(yīng)構(gòu)建pMD18一T—BAGl重組質(zhì)粒、pGEX4T一1一SAG4重組質(zhì)粒，并進行測序分析；3利用限制性內(nèi)切酶雙酶切pMI)18一T—BAGl，切下BAGl基因片段插入以同樣限制性內(nèi)切酶雙酶切的質(zhì)粒pET32a()中，構(gòu)建表達重組質(zhì)粒pET32a()BAGl，并對重組質(zhì)粒進行酶切及測序鑒定；4將重組質(zhì)粒pET32a()BAGl、pGEX4