產(chǎn)ESBLs及質(zhì)粒AmpC酶細(xì)菌的流行病學(xué)研究.pdf

1、目的和意義 通過(guò)調(diào)查華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院臨床分離的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌質(zhì)粒AmpC酶和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的流行情況，分析產(chǎn)質(zhì)粒AmpC酶和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌的耐藥性，檢測(cè)質(zhì)粒AmpC酶的基因型，闡明其分子流行病學(xué)特征，為指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物，減少耐藥菌株的流行及傳播奠定基礎(chǔ)。 方法 選擇華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院細(xì)菌室2004年1月至12月非重復(fù)分離大腸埃希菌468株和肺炎克雷伯

2、菌218株，瓊脂稀釋法檢測(cè)其對(duì)15種抗菌藥物的最低抑菌濃度(minimuminhibitionconcentration，MIC)，標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法檢測(cè)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extendedspectrumbeta-lactamases，ESBLs)，改良三維試驗(yàn)法篩選產(chǎn)AmpC酶菌株，多重聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)和基因測(cè)序檢測(cè)質(zhì)粒AmpC酶(plasmid-mediatedAmpCbeta-l

3、actamases,pAmpC)基因型。 結(jié)果 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的流行率分別為32.7％(153/468)和36.2％(79/218)。 所有產(chǎn)ESBLs和不產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)碳青霉烯類(lèi)藥物亞胺培南均敏感。 不產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)二代、三代、四代頭孢菌素的耐藥率為10.2％～32.7％，產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)二代頭孢菌素的耐藥率高達(dá)90％以上，三代頭孢菌素和四代頭孢菌素(頭孢

4、吡肟)的耐藥率在30％～55％之間，高于不產(chǎn)ESBLs菌株(P＜0.01)；產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)頭霉素類(lèi)(頭孢西丁)、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(lèi)(氨曲南)、含酶抑制劑藥物(阿莫西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦)、氨基糖苷類(lèi)(慶大霉素)、氟喹諾酮類(lèi)(環(huán)丙沙星)的耐藥率分別為53.6％、44.6％、42.9％、40.4％、73.3％、83.0％，高于不產(chǎn)ESBLs菌株的22.4％、20.4％、15.3％、24.5％、39.7％、46.6％，差異均

5、呈極顯著性(P＜0.01)；產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)阿米卡星的耐藥率為12.5％，高于不產(chǎn)ESBLs菌株的2.7％(P＜0.05)。無(wú)論細(xì)菌是否產(chǎn)ESBLs，對(duì)四環(huán)素耐藥率均高于70.6％。產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)含酶抑制劑藥物哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率為12.5％，高于不產(chǎn)ESBLs菌株的8.2％，但兩者差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。不產(chǎn)ESBLs菌株除阿莫西林/克拉維酸和慶大霉素的MIC50、MIC90處于耐藥范圍外，其他藥物的MIC50均在敏

6、感范圍。產(chǎn)ESBLs菌株除頭孢他啶、阿米卡星的MIC50仍在敏感范圍，氨曲南的MIC50達(dá)中介范圍外，其他抗菌藥物的MIC50和MIC90均處于耐藥范圍。 產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)二代頭孢菌素(頭孢唑林、頭孢呋辛)、三代頭孢菌素(頭孢他啶、頭孢噻肟)、四代頭孢菌素(頭孢吡肟)的的耐藥率分別為100％、97.6％、41.0％、61.0％、23.4％，高于不產(chǎn)ESBLs菌株的14.3％、28.6％、4.8％、14.3％、4.8％(

7、均為P＜0.01)；產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)頭霉素類(lèi)(頭孢西丁)、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(lèi)(氨曲南)、含酶抑制劑藥物(阿莫西林/克拉維酸、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦)、氨基糖苷類(lèi)(慶大霉素、阿米卡星)、氟喹諾酮類(lèi)(環(huán)丙沙星)、四環(huán)素的耐藥率分別為58.5％、70.7％、55.1％、26.8％、40.3％、54.5％、63.6％、60.9％，高于不產(chǎn)ESBLs菌株的28.6％、9.5％、13.3％、4.8％、9.5％、27.3％、20.6％、

8、38.5％(均為P＜0.01)；產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)氨基糖苷類(lèi)的阿米卡星的耐藥率為28.8％，高于不產(chǎn)ESBLs菌株的14.3％(P＜0.05)。不產(chǎn)ESBLs菌株除頭孢唑林、四環(huán)素的MIC50和MIC90處于耐藥范圍外，其他藥物的MIC50均在敏感范圍；產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)所有抗菌藥物的MIC50和MIC90均處于耐藥范圍。 改良三維試驗(yàn)法檢測(cè)產(chǎn)AmpC酶細(xì)菌，檢出19株陽(yáng)性細(xì)菌，其中大腸埃希菌6株，檢出率為1.28％(6/468

9、)；肺炎克雷伯菌13株，檢出率為5.96％(13/218)。 19株改良三維試驗(yàn)陽(yáng)性菌株經(jīng)多重PCR測(cè)定，7株菌在405bp左右出現(xiàn)陽(yáng)性條帶，經(jīng)基因測(cè)序，與GeneBank比對(duì)(NoAY887126)，100％吻合，證實(shí)為DHA-1型質(zhì)粒AmpC酶，檢出率為3.2％(7/218)，陽(yáng)性菌全部為肺炎克雷伯菌。 7株產(chǎn)質(zhì)粒AmpC酶肺炎克雷伯菌對(duì)頭孢西丁、頭孢唑林、頭孢呋辛及含酶抑制劑藥物阿莫西林/克拉維酸、慶大霉素全部耐藥

10、；6株菌對(duì)頭孢他啶耐藥，4株菌對(duì)頭孢噻肟耐藥，3株菌對(duì)頭孢吡肟耐藥；5株菌對(duì)氨曲南耐藥；6株菌對(duì)頭孢哌酮/舒巴坦耐藥；6株菌對(duì)阿米卡星耐藥；未發(fā)現(xiàn)亞胺培南耐藥菌株。 結(jié)論 同濟(jì)醫(yī)院2004年大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs流行率為32.7％(153/468)，肺炎克雷伯菌為36.2％(79/218)。 除氟喹諾酮類(lèi)(環(huán)丙沙星)外，不產(chǎn)ESBLs細(xì)菌對(duì)臨床常用抗菌藥物耐藥性大多低于30％。然而，產(chǎn)ESBLs細(xì)菌耐藥性顯著增高

11、，除哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星耐藥率低于30％外，臨床常用抗菌藥物耐藥率大多高于40％。研究仍未發(fā)現(xiàn)亞胺培南耐藥細(xì)菌。 改良三維試驗(yàn)法檢測(cè)，大腸埃希菌產(chǎn)AmpC酶陽(yáng)性率為1.28％(6/468)，肺炎克雷伯菌為5.96％(13/218)。 多重PCR研究，發(fā)現(xiàn)7株pAmpC酶肺炎克雷伯菌(3.2％)，未檢出pAmpC酶大腸埃希菌。7株肺炎克雷伯菌均為DHA-1型質(zhì)粒AmpC酶。 產(chǎn)pAmpC酶菌株顯示多重耐藥特