市售肉菜產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶腸桿菌的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、隨著抗生素的廣泛使用，腸桿菌耐藥成為全球面臨的突出問(wèn)題。細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生使耐藥腸桿菌對(duì)目前臨床上使用的抗生素不再敏感，包括第三、四代頭孢菌素、碳青霉烯類(lèi)藥物等，產(chǎn)ESBLs（Extended-spectrumβ-lactamases）和碳青霉烯酶是細(xì)菌對(duì)上述藥物產(chǎn)生耐藥性的主要機(jī)制之一，也是目前耐藥性研究的熱點(diǎn)之一。對(duì)不同來(lái)源的抗生素耐藥菌研究中，食品源研究尚不多見(jiàn)，本文對(duì)蔬菜源及雞肉源大腸桿菌耐藥性及其ESBLs和碳青霉烯酶基因的分子

2、流行病學(xué)進(jìn)行初步研究，以了解蔬菜及動(dòng)物食品中耐藥腸桿菌的流行情況，為防止耐藥基因的傳播提供依據(jù)。
　　2014~2015年，從廣州各大市場(chǎng)以及超市隨機(jī)采集了395份蔬菜樣品和200份雞肉樣品，分離得到60株大腸桿菌（蔬菜）和134株大腸桿菌（雞肉）。另外，從395份蔬菜樣品中用選擇性平板篩選出33株產(chǎn) ESBLs腸桿菌，包括12株大腸桿菌、19株肺炎克雷伯菌、1株陰溝腸桿菌和1株弗氏檸檬酸桿菌。
　　用瓊脂稀釋法對(duì)隨機(jī)分離得

3、到的大腸桿菌進(jìn)行藥物敏感性檢測(cè)，結(jié)果顯示肉源大腸桿菌對(duì)各種藥物的耐藥情況比蔬菜源更嚴(yán)重。33株蔬菜源產(chǎn) ESBLs腸桿菌對(duì)氨芐西林和頭孢噻肟全部耐藥，對(duì)頭孢喹肟、四環(huán)素、磷霉素、多西環(huán)素、喹乙醇、復(fù)方新諾明的耐藥率均超過(guò)50％，對(duì)亞胺培南全部敏感。33株蔬菜源產(chǎn)ESBLs腸桿菌共檢測(cè)到7種不同亞型的CTX-M基因，分別是blaCTX-M-3、blaCTX-M-15、blaCTX-M-55、blaCTX-M-14、blaCTX-M-24、

4、blaCTX-M-38和 blaCTX-M-65，檢出率最高的是 blaCTX-M-15(n=10)，其次是 blaCTX-M-55（n=7）。不同蔬菜中 blaCTX-M基因的檢出率分別為黃瓜10.4%（12/115）、番茄3.3%（3/90）、生菜13.0%（13/100）和胡蘿卜5.7%（5/90）。
　　從生菜樣品中檢測(cè)到一株產(chǎn)KPC-2的大腸桿菌TS79，多序列位點(diǎn)分型結(jié)果為ST877型。該基因位于一個(gè)大小約54kb的質(zhì)

5、粒上，復(fù)制子分型未成功。藥物敏感性結(jié)果顯示TS79對(duì)黏菌素和替加環(huán)素敏感，對(duì)其他藥物全部耐藥。另外從超市生鮮雞肉中分離到的一株亞胺培南耐藥大腸桿菌THSJ02，多序列位點(diǎn)分型結(jié)果為ST167型，除對(duì)多西環(huán)素和替加環(huán)素敏感以外，對(duì)其余藥物全部耐藥，PCR結(jié)果顯示該菌攜帶mcr-1、blaNDM-9、floR、fosA3、rmtB和 blaCTX-M-65基因。經(jīng)接合試驗(yàn)、S1-PFGE和southern雜交證實(shí)mcr-1基因位于IncI2

6、型質(zhì)粒上，rmtB，blaCTX-M-65和fosA3基因位于F33:A–:B–質(zhì)粒上，而blaNDM-9和另一個(gè)fosA3基因位于一個(gè)約100kb的未知質(zhì)粒上。
　　本研究結(jié)果表明蔬菜和動(dòng)物性食品中存在耐藥腸桿菌，蔬菜源產(chǎn) ESBLs腸桿菌中以產(chǎn)CTX-M-15和CTX-M-55居多，且存在多重耐藥現(xiàn)象。這是首次在蔬菜中檢出對(duì)大部分抗生素耐藥的產(chǎn)KPC酶的大腸桿菌及在雞肉中檢出同時(shí)攜帶blaNDM-9和mcr-1基因的大腸桿菌。