不同來(lái)源大腸桿菌ESBLs基因分子流行病學(xué)研究.pdf

1、 分 類 號(hào)：S859.7 密 級(jí)： 碩 士 學(xué) 位 論 文 不同來(lái)源大腸桿菌 ESBLs 基因分子流行病學(xué)研究 曾 莉 指 導(dǎo) 教 指 導(dǎo) 教 師： 劉健華 教授 學(xué) 院 名 學(xué) 院 名 稱： 獸醫(yī)學(xué)院 專 業(yè) 名 專 業(yè) 名 稱： 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué) 答辯委員會(huì)主席： 答辯委員會(huì)主席： 孫永學(xué) 教授 中國(guó)·廣州 2016 年 6 月 I 摘 要 超廣譜 β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)和 AmpC β-內(nèi)酰胺酶是

2、革蘭陰性桿菌對(duì)第三、四代頭孢菌素類藥物最重要的耐藥機(jī)制。 產(chǎn) CTX-M 型 ESBLs 的大腸桿菌因其能高效水解臨床一線藥物——三代頭孢菌素類藥物， 且食品源和動(dòng)物源產(chǎn) ESBLs 大腸桿菌可經(jīng)食物鏈直接或間接傳播給人，給人和動(dòng)物的健康造成嚴(yán)重威脅。本研究通過(guò)比較不同來(lái)源（動(dòng)物、食品和人）產(chǎn) CTX-M 型 ESBLs 大腸桿菌及其質(zhì)粒的相關(guān)性，為正確評(píng)估三代頭孢菌素類藥物在食品動(dòng)物使用的風(fēng)險(xiǎn)性提供科學(xué)依據(jù)。 2010-2014 年間

3、從廣州市各地區(qū)采集不同來(lái)源樣品， 包括肉類食品 （豬肉和雞肉） 、醫(yī)院病人和社區(qū)健康人源、屠宰前食品動(dòng)物（豬和雞） ，分離了 931 株頭孢噻肟非敏感大腸桿菌。采用 PCR 和測(cè)序方法對(duì) 931 株大腸桿菌進(jìn)行 5 種 ESBLs 和 pAmpC 基因的檢測(cè)和分析。 結(jié)果顯示， 92.8%(864/931)的菌株檢測(cè)到 blaCTX-M、 blaSHV、 blaDHA 和/或 blaCMY 基因，其中 blaCTX-M-14、blaCT

4、X-M-55 和 blaCTX-M-65 是主要的流行型，分別有251 株、150 株和 124 株。另外，有 73 株攜帶 blaCMY 基因。blaCTX-M 在肉類食品源大腸桿菌中檢出率最高為 86.5%； blaCMY在食品動(dòng)物源中檢出率最高 10.6%。 blaCTX-M-1G、blaCMY、 blaCTX-M-55 和 blaCTX-M-24a 陽(yáng)性檢出率在食品動(dòng)物源菌株中最高， 其次為肉類食品源和人源。 blaCTX-M

5、和 blaCTX-M-65 在肉類食品源菌株中檢出率最高， 說(shuō)明肉類食品被耐藥菌嚴(yán)重污染。 blaCTX-M-14 和 blaCTX-M-15 在人源菌株中檢出率最高， 其次為食品動(dòng)物源和肉類食品源。 采用瓊脂稀釋法測(cè)試了 931 株不同來(lái)源大腸桿菌對(duì) 20 種抗菌藥的敏感性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)氨芐西林、頭孢噻肟、鏈霉素、復(fù)方新諾明和四環(huán)素的耐藥率均超過(guò) 70%，受試的所有菌株對(duì)亞胺培南敏感。人、食品動(dòng)物和肉類食品三種不同來(lái)源大腸桿菌均表現(xiàn)對(duì)

6、多種抗菌藥物耐藥，但對(duì)不同藥物的耐藥率有顯著差異。 采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳 （PFGE） 和大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)化分群方法研究 100 株 blaCTX-M-55陽(yáng)性菌株的克隆關(guān)系。結(jié)果表明大部分 blaCTX-M-55 陽(yáng)性菌為非克隆傳播關(guān)系，且多屬于 A 組（45.0%） ，未檢測(cè)出 B2 組大腸桿菌。 采用接合實(shí)驗(yàn)、化學(xué)轉(zhuǎn)化和質(zhì)粒復(fù)制子分型方法研究 blaCTX-M-55 的水平傳播和質(zhì)粒特征。100 株 blaCTX-M-55 陽(yáng)性菌株成