禽源大腸桿菌鏈霉素耐藥質(zhì)粒的分離與鑒定及其耐藥基因的流行病學(xué)研究.pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文禽源大腸桿菌鏈霉素耐藥質(zhì)粒的分離與鑒定及其耐藥基因的流行病學(xué)研究姓名：黃訓(xùn)良申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：秦愛(ài)建20060501黃訓(xùn)良：禽源大腸桿菌耐藥質(zhì)粒的分離鑒定及其流行病學(xué)研究禽源大腸桿菌鏈霉素耐藥質(zhì)粒的分離與鑒定及其耐藥基因的流行病學(xué)研究研究生：黃訓(xùn)良導(dǎo)師：秦愛(ài)建教授摘要本研究通過(guò)19種常用藥物的藥敏實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)室分離保存的216株禽源大腸桿菌對(duì)鏈霉素的耐藥率為75％。提取部分鏈霉素高度耐藥

2、菌株的質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)菌株AE6、AA7、AE9、BA4、BE、AE2具有相似的質(zhì)粒圖譜且均含有一大小在23Kb大小質(zhì)粒。其中BE菌株除對(duì)磷霉素和利福平敏感外，對(duì)其余藥物全部耐藥。且BE菌株只攜帶有2種質(zhì)粒，除23Kb大小質(zhì)粒外，另一種質(zhì)粒小于2Kb。將BE株這兩種質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化DH5Q，鏈霉素藥物平板篩選獲得一鏈霉素抗性轉(zhuǎn)化株。提取轉(zhuǎn)化株質(zhì)粒，以BE株的質(zhì)粒溶液作參照跑電泳，發(fā)現(xiàn)BE株的大質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入此轉(zhuǎn)化株中。轉(zhuǎn)化株的藥敏實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)此質(zhì)粒確

3、實(shí)編碼了鏈霉素的耐藥特性，這些結(jié)果證明23kb的質(zhì)粒與細(xì)菌鏈霉素耐藥基因有關(guān)。根據(jù)GenBank發(fā)表的大腸桿菌鏈霉素耐藥基因aadAl、strA及strB的序列分別設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的216株禽源大腸桿菌三種鏈霉素耐藥基因進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：aadAl、strA和strB的陽(yáng)性率分別為491％，56％和657％。這些結(jié)果與藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本成正相關(guān)，但進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，部分具有鏈霉素耐藥基因的菌株對(duì)鏈霉素有敏感性，且檢