黃芩苷對(duì)CEM白血病細(xì)胞株增殖、凋亡的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的: ①研究中藥黃芩苷(Baicalin)對(duì)人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株CEM細(xì)胞增殖、凋亡的影響。 ②觀察黃芩苷對(duì)CEM細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)基因及蛋白表達(dá)水平的影響，探討其作用機(jī)制。 ③觀察黃芩苷對(duì)CEM細(xì)胞作用后PI3-K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白表達(dá)的變化。 方法: 應(yīng)用MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察黃芩苷對(duì)CEM細(xì)胞增殖的影響； Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞檢測(cè)、AO-

2、EB熒光染色及DNA片段化分析檢測(cè)黃芩苷對(duì)CEM細(xì)胞凋亡的影響；RT-PCR檢測(cè)黃芩苷作用前后c-myc、bcl-2、bax基因mRNA表達(dá)水平的變化，蛋白印跡法(Western-Blot)檢測(cè)c-myc、bcl-2、pro-caspase-3、pro-caspase-9、PARP蛋白以及PI3-K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果: (1)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示黃芩苷能明顯抑制CEM細(xì)胞增殖，

3、半數(shù)抑制濃度(IC50)約為30μM：DNA片段化、AO-EB熒光染色凋亡細(xì)胞的檢出及Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞檢測(cè)等證實(shí)黃芩苷能有效誘導(dǎo)CEM細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡率在一定的藥物濃度范圍內(nèi)與藥物作用濃度和作用時(shí)間呈正相關(guān)。 (2)80μM黃芩苷作用24h、48h、72h后，CEM細(xì)胞c-myc、bcl-2基因mRNA表達(dá)隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減少；也下調(diào)了c-myc、bcl-2、pro-caspase-3、pro-ca

4、spase-9、PARP蛋白的表達(dá)；bax基因mRNA表達(dá)則隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增強(qiáng)。 (3)80μM黃芩苷作用24h、48h、72h后，下調(diào)CEM細(xì)胞Akt信號(hào)通路中蛋白p-Akt、I K B-α、p-I K B-α、p65、p-p65、mTOR、p-GSK-3β及絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)傳導(dǎo)通路中的相關(guān)蛋白MAPK、p-MAPK的表達(dá)；而Akt、GSK-3β的表達(dá)無(wú)明顯變化。 結(jié)論: (1)黃芩