華蟾素注射液親脂性成分及其肝微粒體代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、背景：華蟾素注射液為中華大蟾蜍皮的水溶性制劑，具清熱解毒，化瘀散結(jié)，利水消腫等功效，臨床廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤。華蟾素注射液單獨(dú)使用時，對中晚期肝癌，胃癌，食管癌療效頗佳，可抑有效制腫瘤細(xì)胞生長，提高患者生存質(zhì)量，且副作用小;聯(lián)合用藥時，華蟾素注射液可在一定程度上起到增效減毒作用。其主要活性物質(zhì)為:一、吲哚生物堿類成分，包括蟾蜍色胺，脫羥基蟾蜍色胺，蟾蜍噻嚀，脫氫蟾蜍噻嚀等;二、乙型強(qiáng)心苷類成分，包括蟾毒靈，蟾毒他靈，華蟾毒精，遠(yuǎn)華蟾毒

2、精等，該類成分生物活性主要體現(xiàn)在抗腫瘤方面;三、多肽類成分，是一類分子量分布范圍為700Da到5000Da的混合多肽;四、核酸類成分，包括腺嘌呤，鳥嘌呤，胸腺嘧啶，尿嘧啶等。
　　華蟾素注射液中親脂性成分研究較少，抗腫瘤活性物質(zhì)研究不明確，其代謝產(chǎn)物的相關(guān)研究也少有報道。基于此，本研究對華蟾素注射液中親脂性化學(xué)成分展開了系統(tǒng)的分離并開展了初步的體外藥效篩選，同時，對于含量較高的8種蟾毒配基類成分進(jìn)行了代謝產(chǎn)物分析研究，旨在更好的闡

3、釋華蟾素注射液抗腫瘤的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　目的：
　　1.系統(tǒng)分離華蟾素注射液中親脂性成分并鑒定化合物結(jié)構(gòu)，闡明華蟾素注射液抗腫瘤物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　2.針對分離得到的蟾毒配基類化合物，進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選，闡明蟾毒配基類成分結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和抗腫瘤活性之間的構(gòu)效關(guān)系。
　　3.針對分離得到的八種蟾毒配基類化合物，進(jìn)行體外動物肝微粒體代謝實(shí)驗(yàn)，初步闡明蟾毒配基類化合物和代謝產(chǎn)物之間的代謝規(guī)律及不同種屬間的藥物代謝差異。

4、r>　　方法：
　　1.運(yùn)用硅膠，C18反相硅膠，葡聚糖凝膠LH-20，制備色譜等現(xiàn)代色譜技術(shù)對主要成分進(jìn)行分離，并通過高分辨質(zhì)譜及核磁共振數(shù)據(jù)進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)鑒定。
　　2.通過已知化合物質(zhì)譜裂解規(guī)律分析，運(yùn)用HPLC-Solarix FT-ICR-MS在線分析和文獻(xiàn)對比，推導(dǎo)親脂性部位的化學(xué)成分。
　　3.以三種腫瘤細(xì)胞為研究對象，通過MTT比色法檢測樣品體外抗腫瘤活性，比較分析蟾毒配基類成分因結(jié)構(gòu)差異而導(dǎo)致的抗腫瘤

5、活性的不同。
　　4.運(yùn)用體外肝微粒體孵育法，使用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS對主要蟾毒配基類成分進(jìn)行體外代謝學(xué)的研究，闡明該類化合物可能的體外代謝途徑。
　　結(jié)果：
　　1.從華蟾素注射液中提取分離并鑒定得到21個主要化合物，并鑒定了其中18個化合物的結(jié)構(gòu)。
　　2.通過10種蟾毒配基類化合物體外抗腫瘤活性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)C14-C15位形成氧環(huán)的時候，化合物即活性下降;乙?；〈?，其活性受C14-C1

6、5環(huán)氧取代而不同;羥基取代在含氧環(huán)的結(jié)構(gòu)中影響比較明顯;結(jié)構(gòu)中羰基取代，抗腫瘤活性增加。
　　3.采用液相高分辨質(zhì)譜連用法推導(dǎo)鑒定了其中33個化合物，基本闡明了華蟾素注射液中的親脂性成分。
　　4.對華蟾素中含量較高的八種蟾毒配基類化合物進(jìn)行了體外肝微粒代謝反應(yīng)，初步比較了不同化合物的代謝差異及其在不同種屬間的代謝差異。
　　結(jié)論：
　　1.基本闡明華蟾素注射液中的親脂性化學(xué)成分及對腫瘤細(xì)胞的構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了初步探