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文檔簡介
1、該課題取成年幼鼠后肢屈趾肌腱以改良的組織塊法培養(yǎng)原代肌腱細胞并傳代,將質粒pAdlox-IGF-1和pcDNA3.1(+)轉化DH5α并提取質粒,用限制酶Hind III和BamH I 雙酶切并回收前者的短片段和后者長片段,T<,4>DNA連接酶體外連接,轉化并提取連接產物,酶切及測序鑒定,即可得到IGF-1cDNA的真核表達載體pcDNA3.1(+)-IGF-1.并將pcDNA3.1(+)-IGF-1以脂多胺DOGS介導轉染離體培養(yǎng)的
2、大鼠屈趾肌腱細胞,進行短暫表達研究.為了觀察外源性IGF-1對肌腱細胞分裂增殖的促進作用,該實驗用<'3>H-TdR摻入法檢測肌腱細胞DNA的合成情況:轉染前24小時 ,以2×<'5>/ml的濃度接種細胞于96孔培養(yǎng)板,每孔150μl;然后分別于轉染后24小時、48小時和72小時加入<'3>H-TdR(每孔1μCi)共培養(yǎng)6小時后收集細胞,檢測<'3>H-TdR摻入的CPM值.以空質粒轉染組為對照.同時進行細胞的爬片培養(yǎng),行I型膠原的免
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