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1、培育節(jié)糧瘦肉型轉(zhuǎn)基因豬需要選擇生長相關(guān)的基因構(gòu)建表達載體,本研究選取生長激素釋放肽Ghrelin基因作為目的基因,其Ghrelin屬于生長激素促釋放激素受體(GHS-R)的內(nèi)源性配體,通過與其受體結(jié)合,能夠促進生長激素(GH)的釋放,而且Ghrelin在調(diào)節(jié)能量平衡、增強胃功能以及增強免疫力方面都呈現(xiàn)出重要的效應(yīng)。本研究首先從20日齡的長白豬十二指腸組織中提取總RNA,根據(jù)Genbank(序列號:DQ355969.1)提供的Ghreli
2、ncDNA序列,設(shè)計帶有NheⅠ和HindⅢ酶切位點的引物,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù),然后將該基因片段重組于無多酶切位點的T載體上,構(gòu)建pMD-Ghrelin質(zhì)粒,多次測序,選取克隆完整的DNA片段,用于構(gòu)建pEGFP-Ghrelin重組質(zhì)粒。同時利用PCR擴增技術(shù)、酶切與電泳及基因測序的方法對重組質(zhì)粒進行鑒定。然后,pEGFP-Ghrelin重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成纖維細胞,觀察熒光蛋白的表達。結(jié)果如下:
1.
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