廣西地區(qū)帕金森病PINK1基因突變與多態(tài)性的研究.pdf

1、目的：探討廣西地區(qū)帕金森病(ParkinsonDisease，PD)患者PINK1{Pho-snhataseandtensinhomologue(PTEN)-inducedkinase1}基因1-8號外顯子點突變、缺失突變和多態(tài)性分布特點，及其與帕金森病的關(guān)系。 方法：采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)擴增50例帕金森病組(其中早發(fā)性帕金森病28例、晚發(fā)性帕金森病22例)和55例相匹配的對

2、照組(其中青年對照組17例、老年對照組38例)的PINK1基因1-8號外顯子；用瓊脂糖凝膠電泳(agarosegelelectrophoresis，AGE)檢測PCR產(chǎn)物是否為特異性擴增和PINK1基因1-8號外顯子的大片段缺失突變；單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(singlestrandconformationpolymerphi-sm，SSCP)檢測PINK1基因1-8號外顯子的點突變，并對SSCP出現(xiàn)異常泳帶的相應(yīng)片斷進行DNA直接測序，如果

3、發(fā)現(xiàn)多態(tài)性位點，采用斑點雜交法進行檢測進一步明確其基因型，并計算多態(tài)性位點的基因型頻率和等位基因頻率，所有實驗結(jié)果采用卡方檢驗進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：未發(fā)現(xiàn)帕金森病組和對照組出現(xiàn)PINK1基因外顯子的大片段的缺失突變；在早發(fā)性PD組中有1例出現(xiàn)5號外顯子雜合型突變(G12169A)，導(dǎo)致第341位氨基酸的甲硫氨酸被異亮氨酸所替換(M3411)；并發(fā)現(xiàn)廣西地區(qū)存在PINK1基因5號外顯子G12164A、內(nèi)含子上游調(diào)控區(qū)IVS5-5G

4、-A(即G12101A)連鎖多態(tài)。此多態(tài)位點為已知的單核苷酸多態(tài)，但未見報道它們呈連鎖狀態(tài)。G12164A多態(tài)有G/G和G/A兩種基因型，無A/A基因型，而IVS5-5G-A(G12101A)多態(tài)有G/A和A/A兩種基因型，無G/G基因型。G12164A多態(tài)導(dǎo)致第340位氨基酸上的丙氨酸被蘇氨酸所替(A340T)，其生物學(xué)意義還不清楚。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子上游調(diào)控區(qū)IVS5-5G-A(G12101A)多態(tài)位點位于第五外顯子mRNA剪

5、接受點區(qū)域內(nèi)，極可能破壞基因表達的正常調(diào)控，從而影響PINK1蛋白的翻譯導(dǎo)致PINK1蛋白功能的異?；騿适?。帕金森病組的PINK1基因5號外顯子G12164A、內(nèi)含子上游調(diào)控區(qū)IVS5-5G-A(G12101A)連鎖多態(tài)在G/A、A/A基因型頻率(42％)與對照組(23.6％)相比有升高趨勢(X2=4.034，P=0.045)，在晚發(fā)性PD組中G/A、A/A基因型頻率(45.5％)與老年對照組(21.1％)相比有升高趨勢(X2=3.95