復方氟苯尼考注射液在豬體內(nèi)的殘留消除研究.pdf

1、復方氟苯尼考注射液是一種由氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺組成的新型復方制劑，臨床主要用于治療豬胸膜肺炎放線菌所致的呼吸道感染。本研究旨在建立檢測豬多組織（肝臟、肌肉、腎臟和皮脂）中氟苯尼考殘留標示物的HPLC-MS/MS法和氟尼辛殘留物的HPLC法，研究了復方氟苯尼考注射液在豬組織中的殘留消除規(guī)律，進而為制定該藥在豬體內(nèi)的休藥期提供依據(jù)。
　　1、豬組織中氟苯尼考標示物的HPLC-MS/MS檢測
　　豬各可食性組織（肝臟、腎臟、肌肉

2、和皮脂）使用氨水和乙酸乙酯(v/v3∶97)混合液提取，氮吹后的水復溶液使用乙腈飽和正己烷脫脂，以乙腈和0.1％甲酸水(0-1.5min20％乙腈，4-7min80％乙腈，8-15min100％乙腈，16-25min20％乙腈)為流動相進行梯度洗脫。質譜采用電噴霧離子源(ESI)，正離子和負離子切換，多反應監(jiān)測(MRM)模式。結果表明，氟苯尼考和氟苯尼考胺在10～2000ng/ml濃度范圍內(nèi)，濃度與響應值之間線性良好，相關系數(shù)均大于0.

3、99，方法的檢測限為10μg/kg，定量限為20μg/kg。在20～4000μg/kg的添加濃度范圍內(nèi)，平均添加回收率在79.26％～113.26％之間，批內(nèi)批間變異系數(shù)均小于10％。本實驗建立的方法能滿足豬組織中氟苯尼考殘留量的檢測要求。
　　2、豬組織中氟尼辛殘留量的HPLC檢測
　　豬各可食性組織（肝臟、腎臟、肌肉和皮脂）使用1％ TCA乙腈混合液提取，兩次的合并提取液使用乙腈飽和正己烷脫脂，PCX陽離子交換柱凈化。流

4、動相為甲醇-0.05mol/L磷酸三乙胺溶液，紫外波長為333nm。結果表明，氟尼辛在0.02～5μg/ml濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積之間表現(xiàn)出很好的線性關系(R2=0.9994)。氟尼辛在腎臟和肝臟的檢出限與定量限均分別為15、30μg/kg，皮脂的檢測限與定量限分別為6、10μg/kg，肌肉的檢出限和定量限分別為10、25μg/kg。氟尼辛在腎臟、肝臟添加濃度為30、200和1000μg/kg時，平均添加回收率分別在74.78％～84

5、.67％、83.49％～86.16％之間。在皮脂添加濃度為10、200和1000μg/kg時，平均添加回收率在83.88％～89.26％之間，在肌肉添加濃度為25、200和1000μg/kg時，平均添加回收率在72.10％～89.18％之間，批內(nèi)批間變異系數(shù)均小于10％。本實驗建立的方法能滿足豬組織中氟尼辛殘留量的檢測要求。
　　3、復方氟苯尼考注射液在豬體內(nèi)殘留消除研究
　　25頭商品雜交豬，按40mg/kg·bw（以氟苯

6、尼考計）的劑量肌注復方氟苯尼考注射液，分別于停藥后第1d、6d、11d、16d和21 d時各屠宰5頭豬，采集豬肌肉、肝臟、腎臟、皮脂和注射部位肌肉等可食性組織進行氟苯尼考和氟尼辛標示殘留物的殘留量檢測。測定結果顯示，除注射部位外，停藥后第1d氟苯尼考在豬的各可食性組織中殘留量以腎臟最高，其次是肝臟和皮脂，肌肉最低。停藥后第1d氟苯尼考胺在豬的各可食性組織中殘留量以肝臟最高，其次是腎臟，肌肉和皮脂最低;停藥后第1d氟尼辛在豬的各可食性組織

7、中殘留量以腎臟和皮脂最高，其次是肝臟，肌肉最低。
　　研究表明，停藥后氟苯尼考在肌肉中消除最快，其次是腎臟和皮脂，肝臟最慢，表明肝臟是氟苯尼考的殘留靶器官。采用WT1.4軟件估算氟苯尼考在皮脂、肝臟和腎臟的休藥期，得出氟苯尼考在皮脂、肝臟和腎臟休藥期分別為7.21d、4.62d和10.02d，采用實測數(shù)據(jù)法估算氟苯尼考在肌肉中的休藥期，得出氟苯尼考在肌肉中的休藥期為11d。停藥后氟尼辛在肌肉中消除最快，至停藥后第11d所有豬可食性