微生物04-9179發(fā)酵液中生物活性成分的提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定及其上調(diào)CLA—1活性研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是冠心病、中風(fēng)以及外周血管病的主要病因。目前，人們對AS的產(chǎn)生機(jī)制的研究逐步深入，已證實(shí)與血脂代謝紊亂密切相關(guān)。資料表明高密度脂蛋白膽固醇(highdensitylipoproteincholesterol，HDL-C)濃度與心腦血管疾病發(fā)病率呈負(fù)相關(guān)。清道夫受體SR-B(scavengerreceptorclassB)是目前已闡明一級結(jié)構(gòu)的脂蛋白受體中唯一確定能真正特異性介導(dǎo)細(xì)胞與高

2、密度脂蛋白(highdensitylipoprotein，HDL)作用的受體。SR-BI在機(jī)體脂類代謝調(diào)控中起作用，尤其重要的是它可通過促進(jìn)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(reversecholesteroltransport，RCT)來動(dòng)員機(jī)體外周組織富余的膽固醇經(jīng)由HDL攜帶、轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟或甾體激素合成組織，并最終被利用或排出體外。因此，SR-BI被認(rèn)為是抗動(dòng)脈粥樣硬化的潛在靶標(biāo)。近年來以SR-BI作為靶點(diǎn)的抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物篩選模型開始建立，通過篩選

3、SR-BI基因表達(dá)上調(diào)劑有可能獲得抗AS的先導(dǎo)化合物。本課題組利用自建的CLA-1基因表達(dá)上調(diào)劑篩選模型，對本所微生物次級代謝產(chǎn)物庫(發(fā)酵液或粗提物)進(jìn)行了大規(guī)模高通量篩選，獲得了多個(gè)陽性菌株。 本工作對陽性菌株04-9179大量發(fā)酵后，對其發(fā)酵液進(jìn)行分離純化研究，從中分離出一個(gè)活性化合物9179A和兩個(gè)活性組分9179B、9179C。對陽性化合物9179A進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證，經(jīng)文獻(xiàn)檢索，確證9179A為一已知化合物，化學(xué)名7-(4

4、-(二甲氨基)苯基)-N-羥基-4,6-二甲基-7-氧-2,4-庚二烯酰胺。隨后利用人肝癌細(xì)胞HepG2對9179A上調(diào)CLA-1的作用進(jìn)行了分子生物學(xué)驗(yàn)證，確定其在mRNA水平和蛋白水平均能有效上調(diào)CLA-1的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果也表明，人肝癌細(xì)胞HepG2經(jīng)9179A作用后，增加了細(xì)胞對熒光配基DiI-HDL的結(jié)合和攝取。隨后又利用PPAR激動(dòng)劑篩選模型對9179A的作用機(jī)制進(jìn)行了簡單的探討，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性，初步表明PPA