中國(guó)東海微生物F121112活性成分研究.pdf

1、21世紀(jì)是海洋的世紀(jì)。海洋占全球表面積的71％，以其豐富的各種資源，為世紀(jì)各國(guó)廣大人們所關(guān)注。海洋獨(dú)特的環(huán)境，使海洋生物具有生物物種多樣性、基因多樣性、代謝機(jī)制的多樣性和代謝產(chǎn)物的多樣性，被譽(yù)為“天然藥物的資源寶庫(kù)”，海洋已成為世界各國(guó)開(kāi)發(fā)新型藥物的熱點(diǎn)領(lǐng)域。 本課題采用的實(shí)驗(yàn)菌株F121112是從中國(guó)東海(東經(jīng)120°45′22″～122°40′48″，北緯27°15′50″～31°24′7″)底泥中分離到的一株弱嗜鹽菌，最適

2、鹽度為2.5％，經(jīng)稻瘟霉模型篩選表明對(duì)稻瘟霉有強(qiáng)烈抑制作用，復(fù)篩時(shí)活性不丟失。該菌為革蘭陽(yáng)性細(xì)菌、芽孢中生，生理生化實(shí)驗(yàn)表明具有枯草芽胞桿菌(Bacillussubtilis)的特征。對(duì)F121112的16SrDNA進(jìn)行序列測(cè)定，證實(shí)是枯草芽胞桿菌的一種。 在對(duì)F121112菌株的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化后，F(xiàn)121112菌株的最佳搖瓶發(fā)酵條件是：發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蛋白胨0.4％、酵母提取物0.5％，牛肉膏0.4％，葡萄糖0.5％；培養(yǎng)基

3、初始pH值為6.0～6.5，接種量4％～6％、搖瓶裝量60mL/250mL三角瓶、振蕩頻率130r/min、發(fā)酵溫度25℃、培養(yǎng)時(shí)間120h。在此條件下培養(yǎng)，發(fā)酵液活性最強(qiáng)。 對(duì)F121112菌株產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物的熱穩(wěn)定性研究結(jié)果表明，發(fā)酵液對(duì)熱比較穩(wěn)定，80℃處理1h，其活性沒(méi)有明顯的下降。 采用生物活性跟蹤分離的方法，通過(guò)硅膠柱層析、ODSC-18柱層析、SephadexLH-20凝膠層析以及RP-HPLC等各種色

4、譜技術(shù)，對(duì)F121112產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)進(jìn)行分離純化，得到了20個(gè)化合物。利用1H-NMR、13C-NMR、EI-MS、等波譜技術(shù)解析出其中9個(gè)化合物和一個(gè)混合物的結(jié)構(gòu)。分別是：環(huán)(苯丙氨酸-丙氨酸)Ⅰ、環(huán)(苯丙氨酸-纈氨酸)Ⅱ、環(huán)(D-苯丙氨酸-L-亮氨酸)Ⅲ、環(huán)(D-苯丙氨酸-D-脯氨酸)Ⅳ、環(huán)(L-纈氨酸-L-亮氨酸)Ⅴ、3-甲基-6-(2-甲基丁基)哌嗪-2，5-二酮Ⅵ、環(huán)(L-色氨酸-L-纈氨酸)Ⅶ、尿嘧啶Ⅷ、L-色氨酸Ⅸ和

5、環(huán)(丙氨酸-脯氨酸)Ⅹ。其中化合物Ⅵ是首次從天然產(chǎn)物中分離得到的?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)如下： 對(duì)獲得的化合物采用紙片法進(jìn)行生物學(xué)活性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)化合物Ⅱ和Ⅵ具有對(duì)大腸桿菌(Escherichiacoli)的抑制活性，其中Ⅱ的抑菌圈為19mm，Ⅵ的抑菌圈為14mm。 綜上所述，本項(xiàng)研究工作自海洋枯草芽孢桿菌F121112中分離得到了8個(gè)環(huán)二肽和尿嘧啶以及色氨酸。首次發(fā)現(xiàn)了化合物Ⅱ具有抗大腸桿菌作用?；衔铫鍪鞘状螐奶烊划a(chǎn)物中分離得到