中藥射干及葛花主要活性成分鳶尾黃素的提取分離與微生物轉(zhuǎn)化.pdf

1、鳶尾苷和野鳶尾苷等異黃酮是中藥射干的主要活性成分，葛花苷、次葛花苷、鳶尾黃素、鳶尾苷以及尼泊爾鳶尾異黃酮等是中藥葛花的主要活性成分。將中藥射干甲醇提取物或中藥葛花甲醇提取物進(jìn)行酸水解后均可得到鳶尾黃素。
　　 通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，耐氧突變株Sharpeasp.strainAeroto-Niu-O16在有氧條件下能將底物鳶尾黃素（tectorigenin）進(jìn)行轉(zhuǎn)化。根據(jù)產(chǎn)物的質(zhì)譜及核磁共振氫譜和碳譜等測(cè)定結(jié)果，將菌株轉(zhuǎn)化鳶尾黃素所生成

2、的產(chǎn)物鑒定為二氫鳶尾黃素（dihydrotectorigenin，簡(jiǎn)稱DHT）。耐氧突變株Aeroto-Niu-O16對(duì)底物鳶尾黃素粗品的最大轉(zhuǎn)化濃度為0.8mmol/L，平均轉(zhuǎn)化率為41.2％;當(dāng)向培養(yǎng)基中添加0.15％(m/v)的L-半胱氨酸時(shí)，底物鳶尾黃素的平均轉(zhuǎn)化率可由原來(lái)的41.2％提高到50.7％。利用微生物轉(zhuǎn)化法將鳶尾黃素轉(zhuǎn)化為還原產(chǎn)物DHT尚屬國(guó)內(nèi)外首次報(bào)道。
　　 由于耐氧突變株Sharpeasp.strain

3、Aeroto-Niu-O16對(duì)鳶尾黃素轉(zhuǎn)化率較低，我們從公雞新鮮糞樣中重新分離得到一株在厭氧條件下能將鳶尾黃素高效還原為DHT的革蘭氏陽(yáng)性嚴(yán)格厭氧細(xì)菌AUH-JLC39(KC523278)。通過(guò)BLAST比對(duì)，菌株AUH-JLC39與梭菌屬菌株Clostridiumsp.TM40(AB249652)親緣關(guān)系最近，其16SrDNA序列相似性為99.7％，但與其它梭菌屬菌株的相似性均低于90％。因而，將該轉(zhuǎn)化菌株鑒定為梭菌屬的一個(gè)新分類單元

4、。當(dāng)?shù)孜秫S尾黃素濃度低于0.6mmol/L時(shí)，菌株AUH-JLC39能將加入到培養(yǎng)基中的底物鳶尾黃素全部還原為產(chǎn)物DHT;當(dāng)?shù)孜餄舛葹?.8mmol/L和1.0mmol/L時(shí)，菌株AUH-JLC39對(duì)鳶尾黃素的平均轉(zhuǎn)化率分別為94.2％和90.5％;當(dāng)所加入的底物濃度為1.2mmol/L時(shí)，菌株AUH-JLC39對(duì)底物鳶尾黃素粗品轉(zhuǎn)化能力急劇下降，平均轉(zhuǎn)化率降低為67.1％。經(jīng)轉(zhuǎn)化動(dòng)態(tài)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)孜锱c菌共培養(yǎng)6小時(shí)后即有39.5％的底

5、物鳶尾黃素被轉(zhuǎn)化，共培養(yǎng)12小時(shí)后有81.8％的底物鳶尾黃素被轉(zhuǎn)化。
　　 通過(guò)測(cè)定底物和產(chǎn)物對(duì)二苯代苦味?；杂苫?DPPH)體外清除能力發(fā)現(xiàn)，當(dāng)檢測(cè)濃度在0.25mmol/L到1.0mmol/L范圍內(nèi)時(shí)，相同濃度下產(chǎn)物DHT對(duì)DPPH的清除率均極顯著高于底物鳶尾黃素(p＜0.01);此外，還發(fā)現(xiàn)在該濃度范圍內(nèi)，相同濃度的底物鳶尾黃素對(duì)DPPH自由基的清除率極顯著高于具有較高抗氧化活性的黃豆苷原微生物代謝產(chǎn)物雌馬酚(p＜0.0