黃荊子抗腫瘤活性成分及生物轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、黃荊(Vitex negundo L.)為被子植物馬鞭草科的牡荊屬植物，分布于我國(guó)20余省市，其中以秦巴山區(qū)資源最為豐富，黃荊果實(shí)、葉、枝及根入藥，其味苦，辛，溫。具有清熱解表、利濕解毒、止咳平喘及緩解支氣管痙攣的作用，主治感冒，咳嗽，哮喘，瘧疾，中暑，風(fēng)濕，跌打腫痛等，并能防止甲醛性關(guān)節(jié)炎腫脹的發(fā)展。 本課題采用生物活性導(dǎo)向技術(shù)，應(yīng)用MTT法對(duì)6個(gè)提取部位進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，確定黃荊子中抗腫瘤的有效部位。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙酸乙酯

2、部位對(duì)人乳腺癌(MCF-7)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)，其半數(shù)抑制濃度為66.4μg/mL。并用人癌裸鼠移植瘤模型治療實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)有效部位體內(nèi)抗腫瘤作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙酸乙酯部位對(duì)人卵巢癌(COCl)細(xì)胞、人乳腺癌(MCF-7)細(xì)胞、宮頸癌(Hela)細(xì)胞、人肝癌(Hep G2)細(xì)胞和人胃癌(SGC-7901)細(xì)胞裸鼠移植瘤的瘤重、瘤體積與生理鹽水對(duì)照組相比具有顯著抑制作用(P<0.05)，呈劑量依賴性。上述工作，首次發(fā)現(xiàn)中藥黃荊子具有廣譜抗

3、癌作用，并確定了抗腫瘤有效部位。 采用聚酰胺、Sephadex LH-20、HPLC等多種柱色譜方法對(duì)黃荊子的抗腫瘤有效部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，分離得到10個(gè)化合物，其中4個(gè)有機(jī)酸、2個(gè)苯丙素、4個(gè)木脂素。根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)為：對(duì)羥基苯甲酸(1)、3，4-二羥基苯甲酸(2)、芥子醛(3)、阿魏醛(4)、丁香酸(5)、6-羥基-4-(4-羥基-3-甲氧基苯基)3一羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫(3R,4

4、S)-2-醛基萘(6)、6-羥基-4-(4-羥基-3-甲氧基苯基)3-葡萄糖基氧甲基-7-甲氧基-3，4-二氫(3R,4S)-2-醛基萘(7)、6-羥基-4-(4-羥基-3-甲氧基苯基)3-羥甲基-5-甲氧基-3，4-二氫(3R,4S)-2-醛基萘(8)、3-甲氧基-4-羥基苯甲酸(9)、6-羥基-4-(3，4-二甲氧基苯基)3-羥甲基-5-甲氧基-3，4-二氫(3R,4S)-2-醛基萘(10)。其中化合物7，10為新化合物，化合物3，

5、4首次從該屬植物中分離得到。 用MTT比色法測(cè)定了化合物6、7、8的抗腫瘤活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物6對(duì)人乳腺癌(MCF-7)細(xì)胞、人卵巢癌(COCl)、人肝癌(SMMC-7721)和人結(jié)腸癌(HT-29)都有抑制增殖作用，其中對(duì)人卵巢癌(COCl)抑制增殖作用最強(qiáng)，IC50值達(dá)為1.79μM；化合物7對(duì)人乳腺癌(MCF-7)細(xì)胞亦有增殖抑制作用，且濃度依賴性；化合物8對(duì)人乳腺癌(MCF-7)細(xì)胞和人卵巢癌(COCl)細(xì)胞均有抑

6、制增殖作用。 應(yīng)用人卵巢癌(COCl)裸鼠移植瘤模型治療實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)化合物6、8體內(nèi)抗腫瘤作用。結(jié)果表明，化合物8能有效的抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)(對(duì)照組13874±5652mm3，化合物8 5mg/kg，4495±2087mm3)，瘤重的抑制率達(dá)53.1％(P<0.05)；但化合物6對(duì)人卵巢癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)無(wú)明顯影響。 化合物6對(duì)體外培養(yǎng)人卵巢癌(COCl)細(xì)胞增殖具有顯著的抑制活性，而對(duì)人卵巢癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)無(wú)顯

7、著抑制作用，提示化合物6體內(nèi)代謝過(guò)程可能為失活過(guò)程。由此進(jìn)行化合物6在SD大鼠體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化研究。結(jié)果表明，化合物6代謝轉(zhuǎn)化為6-羥基-4-(4-葡萄糖醛酸基-3-甲氧基苯基)3-羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫(3R,4S)-2-醛基萘、6-羥基-4-(4-葡萄糖醛酸基-3-甲氧基苯基)2，3-二羥甲基-7-甲氧基.3，4-二氫(3R,4S)-萘和6-羥基-4-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-2，3-羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫(3