短小棒狀桿菌CpG DNA的抗腫瘤作用.pdf

1、第一部分，短小棒狀桿菌CpGDNA的抗腫瘤作用
　　 近幾個世紀(jì)以來，經(jīng)常有關(guān)于系統(tǒng)性細菌感染引起腫瘤退化的報道。1890年WilliamColey嘗試探索這一現(xiàn)象，他使用細菌及其產(chǎn)物做了一系列研究來評估其抗腫瘤作用，發(fā)現(xiàn)細菌雖然可以抑制腫瘤發(fā)展，但是同時含有內(nèi)毒素。1994年，研究者發(fā)現(xiàn)細菌DNA可以起到抗腫瘤作用，同時不產(chǎn)生任何內(nèi)毒素[1]。后來發(fā)現(xiàn)細菌DNA中起到抑制腫瘤作用的是其CpG序列，該序列只存在于原核生物中，在哺

2、乳動物中很少并且以甲基化的形式存在。本研究通過提取短小棒狀桿菌(Coryn-ebacteriumparvum，CP)的CpGDNA，分別在體外及小鼠體內(nèi)分析其對免疫細胞和相關(guān)細胞因子的影響，研究其抗腫瘤作用。
　　 目的:
　　 從短小棒狀桿菌中提取CpGDNA，研究其抗腫瘤作用及免疫調(diào)節(jié)機制，以期發(fā)現(xiàn)更有效、更穩(wěn)定、更易獲得的細菌CpGDNA用于腫瘤治療。
　　 方法:
　　 1、使用QiAampDNA

3、MiniKits從短小棒狀桿菌中提取CpGDNA，分別在230nm、260nm和280nm波長下測定吸光度(A)，確定CpGDNA的濃度和純度。
　　 2、MTT法檢測不同濃度CP-CpG-DNA體外對小鼠淋巴瘤細胞YAC-1活性的影響。
　　 3、小鼠接種Hepa1-6小鼠肝癌細胞，建立小鼠肝癌模型。分別設(shè)立空白對照組、模型對照組、短小棒狀桿菌CpGDNA(CP-CpG-DNA)組、短小棒狀桿菌(CP)組、大腸桿菌Cp

4、GDNA(E.coliCpGDNA)組。免疫接種實驗組，隔日一次，共八次。
　　 4、分別稱重模型對照組、CP組、E.coliCpGDNA組、CP-CpG-DNA組腫瘤重量，檢測CP-CpG-DNA體內(nèi)抑瘤作用。
　　 5、取被免疫小鼠脾細胞，MTT法檢測不同組別NK細胞殺傷活性。
　　 6、取被免疫小鼠巨噬細胞，酶聯(lián)免疫法檢測巨噬細胞分泌白介素12（IL-12）和腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量。
　　

5、 7、取被免疫小鼠血清，酶聯(lián)免疫法檢測白細胞介素2（IL-2）含量，分析對T細胞功能的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、經(jīng)蛋白核酸定量測定儀檢測從短小棒狀桿菌中提取的CpGDNA，A260∶A280可以達到1.8，說明提取的DNA純度較高，DNA濃度為105μg/mL。
　　 2、CP-CpG-DNA在體外可以抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1的生長和活性，并且CP-CpG-DNA濃度與腫瘤細胞抑制率呈正相關(guān)關(guān)系。

6、>　　 3、CP-CpG-DNA組的實體瘤明顯比模型對照組的實體瘤重量輕，腫瘤生長抑制率為51.3％，可以抑制小鼠體內(nèi)腫瘤生長。
　　 4、CP-CpG-DNA組能增強荷瘤小鼠的NK細胞對靶細胞小鼠淋巴瘤細胞YAC-1殺傷活性。
　　 5、CP-CpG-DNA組荷瘤小鼠巨噬細胞分泌IL-12的水平能力升高，并且略高于CP組和E.coliCpGDNA組。
　　 6、CP-CpG-DNA組、CP組和E.coliCp

7、GDNA組測得的TNF-α含量均明顯高于空白對照組，但CP-CpG-DNA組、CP組和E.coliCpGDNA組之間測得的TNF-α含量基本持平。
　　 7、CP-CpG-DNA組、CP組和E.coliCpGDNA組測得IL-2的含量略高于空白對照組。
　　 結(jié)論:
　　 通過體內(nèi)外實驗證明從短小棒狀桿菌中提取的CpGDNA可以對腫瘤生長起到抑制作用，其作用機制可能是CpGDNA作為免疫調(diào)節(jié)劑刺激免疫細胞活化和增

8、殖，誘導(dǎo)免疫細胞分泌細胞因子，從而抑制腫瘤細胞生長。
　　 第二部分，風(fēng)疹病毒(RV)IgM抗體質(zhì)控的建立
　　 風(fēng)疹病毒(rubellavirus，RV)主要對孕早期感染婦女危害巨大，可導(dǎo)致胎兒患先天性風(fēng)疹綜合征。目前我國育齡婦女中仍存在一定比例的RV感染者[1]，為了提高人口質(zhì)量，孕期特別是孕早期婦女應(yīng)及時診斷是否感染RV，進行RV-IgM抗體檢測。本研究通過建立風(fēng)疹病毒(RV)IgM的抗體質(zhì)控盤，提高酶聯(lián)免疫法和化

9、學(xué)發(fā)光法試劑盒檢測RV-IgM抗體的準(zhǔn)確性。
　　 目的:
　　 研究并確立風(fēng)疹病毒(RV)IgM的抗體質(zhì)控，為以酶聯(lián)免疫法(ELISA)和化學(xué)發(fā)光法(CLIA)為原理的風(fēng)疹病毒(RV)IgM檢測試劑盒的性能指標(biāo)的評價提供質(zhì)控物。
　　 方法:
　　 通過試劑盒篩選出風(fēng)疹病毒IgM的陽性和陰性血清，將5份不同來源的陽性血清作為質(zhì)控盤的P1～P5，將10份不同來源的陰性血清作為質(zhì)控盤的N1～N10，將5份陽