開口箭皂苷的抗腫瘤作用與其抗腫瘤機(jī)制的研究.pdf

1、開口箭屬(Tupistra)植物隸屬于百合科鈴蘭族(ConvaUarieae)。我國開口箭屬植物種類繁多，資源豐富，主要分布于四川、云南、浙江、廣西、江西、福建等地。本屬植物多為少數(shù)民族民間用藥，中醫(yī)傳統(tǒng)理論認(rèn)為該屬植物苦、辛，性寒，有毒。具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、散瘀止痛等功效，主治白喉、咽喉腫痛、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、胃痛、癰腫瘡毒、毒蛇狂犬咬傷等。開口箭毒副作用小、作用獨(dú)特、來源廣泛，有望成為腫瘤藥物或抗腫瘤輔助藥物。目前對開口箭屬植

2、物的研究報(bào)道不多，主要集中在資源、生藥學(xué)和化學(xué)及藥理學(xué)等方面?，F(xiàn)在根據(jù)已篩選得到的開口箭及活性成分所誘發(fā)的生物治療效應(yīng)來進(jìn)行其抗腫瘤作用的初步研究。 目的：研究從開口箭植物中提取的活性成分，觀察其體內(nèi)抗S-180肉瘤活性的強(qiáng)度；觀察開口箭提取物及其酸解產(chǎn)物體外抑制多種細(xì)胞增殖的效果及其可能的作用相關(guān)機(jī)制。 方法：制備昆明種小鼠S-180移植實(shí)體瘤模型，觀察開口箭提取物口服給藥后的抑瘤作用和對實(shí)驗(yàn)動物體重的影響。MTT比色

3、法檢測細(xì)胞增殖程度。光鏡下觀察藥物作用后細(xì)胞形態(tài)的變化和電鏡下觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。以不同濃度開口箭提取物處理腫瘤細(xì)胞，經(jīng)碘化丙啶(PI)染色后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情況。另加DNA條帶分析判斷細(xì)胞凋亡情況。溶血實(shí)驗(yàn)觀察開口箭提取物對細(xì)胞膜的影響。RT-PCR方法檢測開口箭提取物對U251細(xì)胞的bax和bcl-2基因表達(dá)的影響。激光共聚焦顯微技術(shù)研究開口箭提取物對U251細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度和pH值的影響。結(jié)果：開口

4、箭提取物主要成分為開口箭皂苷(STCB)，它在體外明顯抑制多種細(xì)胞的增殖，IC50為8.5-54.85μg/ml，且對腫瘤細(xì)胞株的殺傷作用比對正常細(xì)胞株更為明顯，具有一定的選擇性。其酸解產(chǎn)物開口箭皂苷元(SGTCB)在體外也能抑制多種細(xì)胞的增殖，IC50為17.20-132.05μg/ml，也具有一定的選擇性，但比STCB效果稍差。經(jīng)灌胃給藥，STCB對荷S-180實(shí)體瘤小鼠表現(xiàn)出良好的抑瘤作用，低劑量(0.5g/kg體重)時(shí)，抑瘤率已

5、超過30％，高劑量(2g/kg體重)時(shí)，抑制率達(dá)到54.86％，且中低劑量并不引起實(shí)驗(yàn)動物的體重下降。電鏡觀察顯示：STCB能引發(fā)腫瘤細(xì)胞的凋亡。FCM檢測進(jìn)一步證明腫瘤細(xì)胞凋亡率隨給藥濃度增加而增加。當(dāng)給藥濃度為10和30μg/ml時(shí)，S期細(xì)胞百分率上升，G2/M期細(xì)胞百分率下降；當(dāng)STCB的濃度達(dá)到60μg/ml時(shí)，G0/G1期細(xì)胞百分率下降，G2/M期細(xì)胞百分率上升；提示低濃度藥物作用阻止S-180細(xì)胞從S期進(jìn)入G2期；高濃度時(shí)，

6、還干擾S-180細(xì)胞的有絲分裂。室溫下，STCB不能引起肉眼可見的溶血現(xiàn)象。STCB作用導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞U251DNA的片斷化，并引起了U251細(xì)胞內(nèi)bax基因表達(dá)量的升高和bcl-2基因表達(dá)量的下降，并可引起IJ25l細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度和pH值的降低。 結(jié)論： 1．開口箭植物中含有可以抑制腫瘤生長的成分，為開口箭皂苷。在體外對多種常見細(xì)胞株有較明顯細(xì)胞毒作用，且對腫瘤細(xì)胞毒性更大，具有一定選擇性。 其酸解產(chǎn)物開口箭

7、皂苷元則對細(xì)胞的毒性效果稍弱。 2．開口箭皂苷在體內(nèi)具有一定的抗實(shí)體瘤效果，且中低劑量的皂苷對實(shí)驗(yàn)動物的體重影響沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高劑量皂苷可造成實(shí)驗(yàn)動物體重下降。 3．開口箭皂苷的體內(nèi)抗實(shí)體瘤有效最高劑量約為最低劑量的4倍。 4．開口箭皂苷引起腫瘤細(xì)胞的死亡主要途徑是誘導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞的凋亡。 5．開口箭皂苷引起腫瘤細(xì)胞的凋亡的可能途徑有：影響了腫瘤細(xì)胞的DNA含量和細(xì)胞周期變化、造成腫瘤細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度和