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文檔簡介
1、背景和目的:土貝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim.) Franquet (Cucurbitaceae)]是一種傳統(tǒng)中藥。我們以前的研究結果已證實從土貝母塊莖中分離得到的土貝母皂苷(以下簡稱皂苷)、苷甲(以下簡稱苷甲)有強抗腫瘤效果和誘導腫瘤細胞凋亡作用。本研究旨在探討皂苷、苷甲對腫瘤侵襲、轉移能力的影響,并對其可能機理進行研究。 方法: 1. MTT法檢測皂苷、苷甲對人高轉移巨細胞肺癌PG
2、CL3細胞(以下簡稱PGCL3細胞)生長的影響。 2. 相關基底膜成分分析試驗、重組基底膜侵襲試驗、Transwell室趨化運動模型研究皂苷、苷甲對PGCL3細胞的粘附、侵襲和運動能力的影響。 3. 明膠酶譜法檢測皂苷、苷甲對PGCL3細胞Ⅳ型膠原酶的分泌量及Ⅳ型膠原酶活性的影響。 4. Lewis肺癌裸鼠移植瘤轉移模型檢測苷甲對腫瘤體內生長與轉移能力的影響。 5. B16黑色素瘤轉移模型檢測苷甲對腫瘤體
3、內轉移能力的影響。 6. 免疫組化法檢測苷甲對LLC細胞轉移基因CD44v6、c-erbB2、mn23-H1表達的影響。 結果: 1. 皂苷、苷甲明顯抑制PGCL3細胞的生長,且呈劑量依賴關系。皂苷作用PGCL3細胞24、48、72 h的IC50值分別為16.8、14.6、14.4 μmol·L-1;苷甲作用PGCL3細胞24、48、72 h的IC50值分別為15.7、14.2、13.3 μmol·L-1。
4、 2. 皂苷1.25、2.50、5.00 μmol·L-1 處理PGCL3細胞24 h,對PGCL3細胞侵襲能力的抑制率分別為26.5%、35.7%、50.7%;苷甲1.25、2.50、5.00 μmol·L-1處理PGCL3細胞24 h,對PGCL3細胞侵襲能力的抑制率分別為28.7%、41.0%、57.5%。 3. 皂苷1.25、2.50、5.00 μmol·L-1 處理PGCL3細胞24 h,對PGCL3細胞運動能力的抑
5、制率分別為19.2%、29.1%、45.8%;苷甲1.25、2.50、5.00 μmol·L-1處理PGCL3細胞24 h,對PGCL3細胞運動能力的抑制率分別為21.6%、35.2%、53.7%。 4. 皂苷、苷甲1.25、2.50、5.00 μmol·L-1處理PGCL3細胞24 h,降低PGCL3細胞對層粘連蛋白、纖維粘連蛋白的粘附率。 5. 皂苷、苷甲降低PGCL3細胞Ⅳ型膠原酶的分泌量及其活性,且呈一定的劑量依
6、賴關系。 6. BALB/c裸小鼠腹腔注射苷甲(1.5 μmol / kg ·d和2.3 μmol / kg ·d)14天,對裸鼠的體重無明顯的影響。 7. BALB/c裸小鼠背部皮下接種LLC細胞,可100%形成原發(fā)瘤,并發(fā)生自發(fā)性肝轉移。BALB/c裸小鼠尾靜脈接種B16細胞,同時發(fā)生肝轉移與肺轉移。 8. 苷甲可明顯抑制原發(fā)瘤的生長。苷甲1.5 μmol / kg ·d和2.3 μmol / kg ·d對原
7、發(fā)瘤生長的抑制率分別為49.6%和58.0%。 9. 苷甲1.5 μmol/kg·d和2.3 μmol/kg·d對Lewis肺癌體內自發(fā)性肝轉移抑制率分別為46.3%和52.0%;對B16黑色素瘤細胞體內實驗性肝轉移抑制率分別為29.7%和45.3%;對B16黑色素瘤細胞體內實驗性肺轉移抑制率分別為68.8%和82.8%。 10. 苷甲作用后,LLC細胞轉移抑制基因nm23-H1的表達升高,轉移促進基因CD44v6和c-
8、erbB2的表達降低。 結論: 1. 皂苷、苷甲可抑制PGCL3細胞體外粘附、侵襲和遷移能力,且呈劑量依賴性。體外實驗結果顯示,在低濃度條件下(≤5μmol·L-1 ) 苷甲抗腫瘤細胞體外侵襲能力比皂苷稍強。 2. 皂苷、苷甲對PGCL3細胞粘附和侵襲和遷移能力的影響與其降低PGCL3細胞Ⅳ型膠原酶的分泌量及其活性相關。 3. 苷甲對BALB/c裸小鼠無明顯的毒副作用。 4. 苷甲可明顯抑制BAL
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