人參皂苷Rh2抗腫瘤作用的細(xì)胞與分子調(diào)控機(jī)理.pdf

1、人參皂苷G-Rh2系人參中提取的達(dá)瑪烷二醇型皂苷，為人參抗腫瘤效應(yīng)的主要有效成分。盡管大量的體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)G-Rh2具有抗腫瘤的藥理活性，但是G-Rh2抗腫瘤作用的細(xì)胞和分子調(diào)控機(jī)理，尤其是它的非器官特異性抗腫瘤作用機(jī)理目前仍不甚清楚。有鑒于此，我們借助研究細(xì)胞體外增殖和分化的良好模型——HL-60細(xì)胞系，通過基因芯片和二維電泳技術(shù)，結(jié)合生物信息學(xué)方法，從轉(zhuǎn)錄本組和蛋白質(zhì)組水平全面探討G-Rh2抗腫瘤作用涉及的信號通路和分子作用網(wǎng)絡(luò)，

2、以初步闡明G-Rh2抗腫瘤作用的細(xì)胞和分子調(diào)控機(jī)理。 目的： 從轉(zhuǎn)錄本組和蛋白質(zhì)組水平全面探討G-Rh2抗腫瘤作用涉及的信號通路和分子作用網(wǎng)絡(luò)，以初步闡明G-Rh2抗腫瘤作用的細(xì)胞和分子調(diào)控機(jī)理。 方法： 用MTT、流式細(xì)胞技術(shù)、DNA片段化等實(shí)驗(yàn)證實(shí)G-Rh2的體外抗腫瘤活性，使用基因芯片和二維電泳技術(shù)獲取G-Rh2處理和未處理的HL-60細(xì)胞的基因表達(dá)譜和蛋白質(zhì)表達(dá)譜，通過生物信息學(xué)軟件GenMAPP

3、對基因表達(dá)譜進(jìn)行Pathway分析，推斷介導(dǎo)G-Rh2抗腫瘤作用的可能信號通路和分子網(wǎng)絡(luò)。用RT-PCR和Western blotting對基因芯片中關(guān)鍵的差異表達(dá)分子進(jìn)行驗(yàn)證，使用中和抗體對關(guān)鍵的差異表達(dá)分子的功能進(jìn)行初步探討。 結(jié)果： G-Rh2呈濃度依賴性抑制人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡，同時阻滯細(xì)胞周期于G1期。此外，G-Rh2對K562、KM3細(xì)胞的增殖亦有明顯的抑制作用；25μmol／L G-

4、Rh2(IC50)處理HL-60細(xì)胞48 h后，140個基因表達(dá)發(fā)生明顯改變。其中95個基因表達(dá)上調(diào)，45個基因表達(dá)下調(diào)。表達(dá)上調(diào)最明顯的為腫瘤壞死因子TNFα；運(yùn)用GenMAPP軟件對上述基因表達(dá)譜進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)基因表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的改變與G-Rh2對HL-60細(xì)胞增殖的抑制及凋亡的誘導(dǎo)等表型改變基本一致。RT-PCR和Western blotting分析顯示，TNF α在G-Rh2處理的HL-60細(xì)胞中呈時間依賴性表達(dá)上調(diào)。此外，G-Rh2

5、亦能明顯誘導(dǎo)K562細(xì)胞中TNF α表達(dá)上調(diào)；TNF α的抗體中和實(shí)驗(yàn)證實(shí)，G-Rh2誘導(dǎo)的TNF α高表達(dá)，通過自分泌的形式抑制HL-60細(xì)胞增殖，并在G-Rh2抗腫瘤效應(yīng)中發(fā)揮重要作用；二維電泳分析顯示，G-Rh2能明顯誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞蛋白表達(dá)譜的改變，下一步將對差異表達(dá)明顯的蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，并深入探討其在介導(dǎo)G-Rh2抗腫瘤中的功能作用。 結(jié)論： G-Rh2能有效的抑制人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞增殖，引