土貝母苷甲和皂苷抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的研究.pdf

1、【研究背景與目的】 土貝母，[Bolbostemma paniculatum（Maxim.）Franquet(Cucurbitaceae)]是一種傳統(tǒng)中藥，載于清代趙學(xué)敏編著的《本草綱目拾遺》。古代用它的塊莖來治療乳巖、乳癰、乳腺增生和瘰疬等疾患，臨床上顯示出明顯的散結(jié)毒、消癰腫效果。四川省和陜西省的老中醫(yī)用它來治療食道癌和胃癌，效果顯著，但因惡心、嘔吐等消化道副作用而限制了它的臨床應(yīng)用。我們從1978年開始從生藥土貝母中分離、

2、純化抗癌活性成分土貝母皂苷 (以下簡稱皂苷，主要由土貝母苷甲和土貝母苷乙組成)，對其中得率最高（1.9％）、水溶性和穩(wěn)定性較好的土貝母苷甲（以下簡稱苷甲）的藥效學(xué)、藥代動力學(xué)、毒理學(xué)進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，并對皂苷的幾種天然衍生物的構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)土貝母苷乙是最有希望用于臨床試驗(yàn)的化合物，但從增加得率（皂苷的得率約為2.4％）、簡化工藝、降低成本和臨床應(yīng)用的角度而言，皂苷則是一個應(yīng)該首先開發(fā)的產(chǎn)品。 以前我們的工作已

3、經(jīng)證明土貝母苷甲和皂苷具有抗腫瘤活性，且抗瘤譜廣；還能將人宮頸癌細(xì)胞（HeLa）、人早幼粒白血病細(xì)胞（HL-60）阻滯在G2/M期,誘導(dǎo)人鼻咽癌細(xì)胞（CNE-2Z）凋亡；苷甲能抑制血管生成。 本實(shí)驗(yàn)通過土貝母苷甲和皂苷對黑色素瘤B16細(xì)胞體外侵襲轉(zhuǎn)移影響的研究和皂苷對Lewis肺癌裸鼠移植瘤肝轉(zhuǎn)移影響的研究，為開發(fā)臨床抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 【方法】 1. MTT法檢測苷甲和皂苷對B16細(xì)胞生長的影響；

4、 2. MTT法研究苷甲和皂苷對B16細(xì)胞黏附的影響； 3. 體外基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)研究苷甲和皂苷對B16細(xì)胞侵襲的影響； 4. 體外運(yùn)動實(shí)驗(yàn)研究苷甲和皂苷對B16細(xì)胞運(yùn)動的影響； 5. 動物實(shí)驗(yàn)觀察皂苷對Lewis肺癌裸鼠移植瘤生長和肝轉(zhuǎn)移的影響； 6. 免疫組化法檢測皂苷對Lewis肺癌移植瘤組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞因子（bFGF）、血小板衍化生長因子（PDGF）、增殖細(xì)胞核抗

5、原（PCNA）表達(dá)和細(xì)胞表面黏附分子CD44v6、原癌基因c-erb-B2、抑癌基因nm23-H1表達(dá)的影響； 7. HE染色觀察腫瘤組織形態(tài)學(xué)的變化。 【結(jié)果】 1. 苷甲和皂苷對B16細(xì)胞的生長有抑制作用，其效果與濃度相關(guān)，苷甲和皂苷作用6h的IC50分別為27μmol·L-1和32.6μmol·L-1； 2. 苷甲和皂苷對B16細(xì)胞的黏附、侵襲和運(yùn)動有抑制作用； 3. 皂苷能夠明顯抑制Lew

6、is肺癌裸鼠移植瘤生長和肝轉(zhuǎn)移； 4. 皂苷能夠降低Lewis肺癌裸鼠移植瘤組織中VEGF、bFGF、PCNA、PDGF的表達(dá)； 5. 皂苷能夠降低Lewis肺癌裸鼠移植瘤組織中CD44v6、c-erb-B2的表達(dá)，增強(qiáng)nm23-H1的表達(dá)。 【結(jié)論】 土貝母苷甲和皂苷體外能夠明顯抑制B16細(xì)胞的黏附、侵襲和運(yùn)動，體內(nèi)能顯著抑制Lewis肺癌裸鼠移植瘤的生長和肝轉(zhuǎn)移。土貝母苷甲和皂苷具有作為抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥