黃芩苷抗腫瘤作用分子機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、1.黃芩苷對(duì)S180荷瘤小鼠抑瘤作用機(jī)制的研究
　　目的：探討黃芩苷對(duì)S180荷瘤小鼠的抑瘤作用機(jī)制。
　　方法：取60只小鼠復(fù)制S180荷瘤模型，隨機(jī)分成5組：黃芩苷大、中、小劑量組，對(duì)照組，環(huán)磷酰胺組。觀察黃芩苷對(duì)S180荷瘤小鼠的抑制率、脾指數(shù)及胸腺指數(shù)，NK（natural killer，NK）細(xì)胞活性及血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis facter-α，TNF-α)、白介素-2（interleuk

2、in-2，IL-2）的含量，腫瘤組織血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)。
　　結(jié)果：各種劑量的黃芩苷對(duì)小鼠S180肉瘤均有明顯的抑制效應(yīng)，且呈現(xiàn)劑量依賴性，大、中、小劑量組小鼠抑瘤率分別為56.0％、48.0％、36.0％，與對(duì)照組比較均有顯著性差異（P<0.05）。此外，與對(duì)照組比較，黃芩苷大、中劑量組的脾指數(shù)有顯著性差異（P<0.05）；大、中、小劑量組的胸

3、腺指數(shù)、NK細(xì)胞活性、血清TNF-α、IL-2含量均有顯著性差異（P<0.05）。Western blot結(jié)果表明，VEGF在黃芩苷大、中、小劑量組小鼠瘤組織中的表達(dá)與對(duì)照組比較，有顯著性差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：黃芩苷能夠抑制S180荷瘤小鼠腫瘤生長；并能明顯升高S180荷瘤小鼠脾細(xì)胞NK細(xì)胞活性及血清TNF-α、IL-2的含量，對(duì)小鼠的免疫功能有調(diào)節(jié)作用；同時(shí)黃芩苷可以下調(diào)S180荷瘤小鼠腫瘤組織VEGF的表達(dá)。

4、>　　2.黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用的研究
　　目的：研究黃芩苷體外對(duì)HepG-2細(xì)胞抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用，并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法：采用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法，應(yīng)用MTT法檢測黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞的抗增殖作用及細(xì)胞毒活性；通過倒置顯微鏡、HE染色、掃描電鏡（scannin electron microscope，SEM）觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的改變；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，

5、FCM）分析細(xì)胞周期和凋亡率，觀察黃芩苷對(duì)HepG-2細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用；通過免疫細(xì)胞化學(xué)(S-P法)檢測凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax、p53蛋白表達(dá)的改變；采用Westernblot技術(shù)檢測Caspase-3蛋白表達(dá)情況，初步探討黃芩苷在體外對(duì)HepG-2細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用的可能機(jī)制。
　　結(jié)果：(1) MTT比色法結(jié)果表明，黃芩苷在體外對(duì)HepG-2細(xì)胞有明顯的抑制作用，且這種抑制作用呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性。(2)形態(tài)學(xué)觀察：倒

6、置顯微鏡、掃描電鏡及HE染色結(jié)果表明，黃芩苷作用于腫瘤細(xì)胞后，可誘導(dǎo)較典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化及超微結(jié)構(gòu)改變，如細(xì)胞胞體縮小，胞質(zhì)濃縮，微絨毛結(jié)構(gòu)減少甚至消失，胞核向外呈銳角突起，染色質(zhì)高度濃縮，電子密度增高，邊集于核膜下或呈新月形，有的出現(xiàn)核固縮，核碎裂以及凋亡小體形成等。（3）免疫細(xì)胞化學(xué)(S-P法)檢測凋亡相關(guān)基因bcl-2、p53蛋白表達(dá)明顯減少、bax表達(dá)明顯增加；Bcl-2/Bax比例明顯降低。(4)流式細(xì)胞儀分析結(jié)果，50

7、μg/ml黃芩苷作用于HepG-2細(xì)胞48 h后，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡峰，其凋亡率為27.01%，與對(duì)照組細(xì)胞的凋亡率5.47%相比差異有顯著性（P＜0.01）。且G2/M期細(xì)胞明顯減少，而S期細(xì)胞比率顯著上升，多數(shù)細(xì)胞阻滯在S期。（5）Western blot結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的增加Caspase-3酶原蛋白條帶逐漸變細(xì)，并且可見到蛋白裂解產(chǎn)物（Caspase-3蛋白）逐漸增多。
　　結(jié)論：黃芩苷對(duì) HepG-2細(xì)胞具有較強(qiáng)的