紋帶棒狀桿菌為主的棒狀桿菌耐藥性及其耐藥機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討臨床分離的類白喉棒狀桿菌對常用抗生素的耐藥性及其耐藥機(jī)制。
　　 方法：對石家莊和邢臺地區(qū)臨床分離的26株類白喉棒狀桿菌采用CLSI（臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所）推薦的瓊脂稀釋法對10種常用藥物（頭孢唑啉、頭孢呋辛酯、萬古霉素、替考拉寧、紅霉素、四環(huán)素、米諾環(huán)素、氧氟沙星、克林霉素、鏈霉素）進(jìn)行了最低抑菌濃度(MIC)檢測，同時(shí)采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法檢測26株類白喉棒狀桿菌的總DNA中的5'CSⅠ類整合酶基因(int

2、I)及可變區(qū)，確定細(xì)菌攜帶Ⅰ類整合子的情況。同時(shí)檢測紅霉素耐藥基因ermA、ermB、ermC、ermX、mefA/E及轉(zhuǎn)座子Tn1545整合酶intTn，并探討其與耐藥的關(guān)系。
　　 結(jié)果：結(jié)果顯示，26株類白喉棒狀桿菌中，20株對頭孢唑啉不敏感，17株對頭孢呋辛酯不敏感。所測全部對糖肽類抗生素（萬古霉素和替考拉寧）敏感。對紅霉素和克林霉素呈現(xiàn)高度耐藥（MIC＞512μg/ml），分別只有2株和3株敏感。對四環(huán)素類（四環(huán)素和米

3、諾環(huán)素）均只有9株敏感，其余17株不敏感菌株MIC值大部分大于128μg/ml。對于氟喹諾酮類（氧氟沙星）MIC值大部分在64-128μg/ml之間，僅7株敏感。鏈霉素的MIC值大部分在64-512μg/ml之間，僅8株敏感。對總DNA中的5'CSⅠ類整合酶基因(intI)進(jìn)行擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)15株整合酶陽性，繼而對其可變區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，有5株陽性，擴(kuò)增出長度為1010bp的條帶。應(yīng)用BLAST在NCBI上進(jìn)行比對，確定其攜帶了aadA2基因盒(

4、GenBank:FJ855127)。基因盒介導(dǎo)對鏈霉素耐藥。對紅霉素耐藥基因進(jìn)行檢測時(shí)，發(fā)現(xiàn)26株有10株含有ermX基因(擴(kuò)增片段為390bp，GenBank：AM748802.1)，3株含有ermA基因（擴(kuò)增片段為618bp，GenBank：FN435325.1），15株含有ermB基因（擴(kuò)增片段為610bp，GenBank：EU168327.1）。13株含有轉(zhuǎn)座子Tn1545整合酶intTn（擴(kuò)增片段為1062bp，GenBank

5、：X61025.1）。26株棒狀桿菌中均沒有檢測到ermC和mefA/E。實(shí)驗(yàn)菌株中有4株未檢測到任何erm基因，其中2株對克林霉素敏感而對紅霉素耐藥（M耐藥）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，介導(dǎo)類白喉棒狀桿菌對紅霉素耐藥的主要機(jī)制是由于作用靶位發(fā)生改變，由erm基因介導(dǎo)的核糖體甲基化修飾。26株類白喉棒狀桿菌對紅霉素耐藥大部分都屬于結(jié)構(gòu)型耐藥。通過對erm基因的研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)菌株中其中占主要地位的是ermB，其次是ermX。ermX是一類棒狀桿

6、菌屬特有的能夠介導(dǎo)棒狀桿菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的基因。ermB基因位于Tn917、Tn1545或類似的結(jié)合型、非結(jié)合型轉(zhuǎn)座子內(nèi)，或由質(zhì)粒攜帶，能在細(xì)菌間廣泛傳播，對此，我們進(jìn)一步檢測了轉(zhuǎn)座子Tn1545整合酶intTn，發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)座子整合酶陽性的菌株與ermB陽性的菌株符合率達(dá)到86.67％，這也證實(shí)了ermB基因由Tn1545攜帶，通過接合型轉(zhuǎn)座子Tn1545在種屬間傳播。
　　 結(jié)論：26株類白喉棒狀桿菌攜帶多種erm