BCG-CPG-DNA佐劑的作用機理研究與評價.pdf

1、疫苗佐劑能夠非特異性提高機體對抗原的適應性免疫應答，在疫苗的接種免疫過程中發(fā)揮輔助作用:同疫苗一起使用，能誘發(fā)機體產(chǎn)生長期、高效的特異性免疫反應，提高機體保護能力，降低疫苗的免疫用量，降低疫苗成本、減少疫苗所引發(fā)的不良反應。近年來，為適應新型疫苗的需求，佐劑已經(jīng)從傳統(tǒng)、單一的形式向新型、多元化形式發(fā)展，尤其用于黏膜疫苗、DNA疫苗及腫瘤疫苗的佐劑研究成為熱點。其中CPG寡核苷酸(CPG ODN)是目前研究的熱點，細菌DNA中含有大量非甲

2、基化CPG基序，因此細菌DNA和CPG ODN統(tǒng)稱為CPG DNA。BCG-CPG-DNA是從減毒牛型分枝桿菌卡介苗中提取的基因組DNA片段，分子量大于1Kbp，富含未甲基化的CPG基序，純度高、質(zhì)量可控。
　　本研究通過應用BCG-CPG-DNA佐劑作用于小鼠后，觀察注射后不同時間點脾臟內(nèi)淋巴細胞比例變化、血清中細胞因子的變化、和注射部位免疫細胞的募集情況來分析探索BCG-CPG-DNA佐劑的作用機理，通過與鋁佐劑及復合佐劑BC

3、02的比較對其佐劑效應特點做出初步評價。
　　一、小鼠脾臟淋巴結(jié)淋巴細胞分型
　　本研究通過對比不同佐劑作用于小鼠后不同時間點脾臟淋巴結(jié)內(nèi)淋巴細胞比例的變化來探索BCG-CPG-DNA佐劑的作用機理和評價其佐劑效應特點。用PBS作為機理探索對照，用鋁佐劑和復合佐劑BC02作為評價對照，分別于注射后6h、12h、24h、48 h、72 h和96 h無菌獲取脾臟內(nèi)淋巴細胞，用流式細胞儀檢測脾臟內(nèi)淋巴細胞比例。結(jié)果顯示:BCG-C

4、PG-DNA進入機體后能同時促進B淋巴細胞和T淋巴細胞的活化、增殖和分化，介導機體內(nèi)Th1免疫應答和Th2免疫應答。同鋁佐劑復合使用，比兩者單獨使用對體內(nèi)免疫應答有更強的介導作用。
　　二、小鼠注射部位免疫細胞募集
　　本研究通過對不同佐劑作用于小鼠后不同時間點注射部位肌肉組織中免疫細胞的募集情況來探索BCG-CPG-DNA佐劑的作用機理和評價其佐劑效應特點。用PBS作為機理探索對照，用鋁佐劑和復合佐劑BC02作為評價對照，

5、分別于注射后24 h、48 h、72 h和96 h獲取注射部位肌肉組織，冰凍切片，經(jīng)MHC-Ⅱ類分子特異性熒光染色、HE染色觀察注射部位免疫細胞募集情況和炎性細胞浸潤情況。結(jié)果顯示:BCG-CPG-DNA進入機體后能引起注射部位肌肉組織炎性細胞浸潤，并能夠在注射部位募集DC等免疫細胞，促進抗原提呈和機體內(nèi)免疫應答過程;對免疫細胞的募集速度大于鋁佐劑但對免疫細胞的募集能力低于鋁佐劑，同鋁佐劑復合使用，有更強更迅速的免疫細胞募集能力。

6、>　　三、小鼠血清細胞因子的檢測
　　本研究通過對不同佐劑作用于小鼠后不同時間點血清中細胞因子濃度的變化來探索BCG-CPG-DNA佐劑的作用機理和評價其佐劑效應特點。用未處理的小鼠血清細胞因子濃度作為正常值參考，用PBS作為機理探索對照，用鋁佐劑和復合佐劑BC02作為評價對照，分別于注射后6h、12h、24 h、48 h、72 h和96 h收集血清，用多因子試劑盒檢測細胞因子IL-17、IL2、IL-5、IL-6、IL-10、I

7、FN-γ、TNF-α、G-CSF、IP-10和MCP-1濃度。結(jié)果顯示:BCG-CPG-DNA進入機體后能明顯促進和刺激血液中各種細胞因子濃度水平的升高;相比于鋁佐劑，BCG-CPG-DNA進入機體短時間內(nèi)即可刺激機體產(chǎn)生高濃度水平的細胞因子，作用更加迅速和及時;同鋁佐劑復合使用，比兩者單獨使用對血清細胞因子的產(chǎn)生有更強的促進作用。
　　四、結(jié)論
　　BCG-CPG-DNA佐劑作用于機體能引起注射部位以DC為主的免疫細胞的募