炎癥致低密度脂蛋白受體表達(dá)失調(diào)在糖尿病腎病足細(xì)胞損傷中的作用研究.pdf

1、目的：現(xiàn)認(rèn)為糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是一種慢性、炎癥性疾病，各種炎癥相關(guān)分子在DN的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，同時DN又存在不同程度的脂代謝紊亂，二者常協(xié)同致病。我們既往研究證實，炎癥可通過誘導(dǎo)低密度脂蛋白受體(lowdensity lipoprotein recepter，LDLr)表達(dá)失調(diào)，加速脂代謝紊亂介導(dǎo)的細(xì)胞、組織損傷，促進(jìn)動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的發(fā)生發(fā)展。本研

2、究旨在通過體內(nèi)、體外實驗觀察炎癥介導(dǎo)的LDLr表達(dá)失調(diào)在DN足細(xì)胞損傷中的作用，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：將8周齡雄性db/db小鼠及對照組db/m小鼠，分別隨機(jī)分為db/db、db/db+casein組和db/m、db/m+ casein組，每組均為8只。db/m+casein組及db/db+casein組隔日給予背部皮下注射10％ casein溶液0.5ml以刺激產(chǎn)生慢性、持續(xù)性、微炎癥反應(yīng)，建立DN微炎癥模型;db

3、/m組及db/db組隔日給予背部皮下注射蒸餾水0.5ml作對照。收集動物血漿及腎臟組織標(biāo)本，檢測小鼠的血清炎癥因子水平;病理染色及電鏡評估腎臟形態(tài)改變及足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化情況;免疫組化及Western Blot檢測腎臟組織炎癥因子表達(dá)情況;體外研究采用體外培養(yǎng)小鼠永生系足細(xì)胞，對分化的足細(xì)胞予不同的刺激，觀察在高糖條件下炎癥對足細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積及脂代謝信號通路的影響，以及對足細(xì)胞表型改變的作用。油紅O染色、Filipin染色及化學(xué)酶促-比

4、色法觀察腎臟及足細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚情況;Real-time PCR、Western Blot及免疫熒光染色法檢測足細(xì)胞特異性生物標(biāo)志物nephrin、α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscle actin，α-SMA)、纖維連接蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）、胞外基質(zhì)Ⅰ型膠原以及LDLr信號通路相關(guān)因子表達(dá)。
　　結(jié)果：體內(nèi)研究證實，炎癥刺激后，糖尿病小鼠的血肌酐(serum creatinine，Scr)及蛋白尿水平明顯

5、增加、肌酐清除率(creatinine clearance，Ccr)明顯下降，發(fā)生了顯著的系膜基質(zhì)增生、腎小球基底膜(glomerular basement membrane，GBM)增厚及腎小球硬化，DN進(jìn)展加速。同時觀察到，持續(xù)的微炎癥使DN小鼠發(fā)生了顯著的足突融合、脫落及表型改變。進(jìn)一步研究證實，炎癥刺激增加了DN小鼠腎臟中脂質(zhì)堆積，上調(diào)LDLr、SREBP-2、SCAP的蛋白表達(dá)。體外研究也證實，炎癥增加足細(xì)胞脂質(zhì)堆積。進(jìn)一步研

6、究顯示，炎癥刺激后足細(xì)胞胞LDLr、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-2（sterol regulatory element binding protein-2，SREBP-2）及SREBP裂解激活蛋白（SREBP cleavage-activating protein，SCAP）表達(dá)升高。激光共聚焦顯微鏡證實，炎癥能夠增加胞內(nèi)SCAP/SREBP-2復(fù)合物從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體的共轉(zhuǎn)位，進(jìn)而上調(diào)LDLr基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)細(xì)胞膽固醇攝入。同時，炎癥介導(dǎo)的脂