胞紅蛋白在氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的:胞紅蛋白（cytoglobin，CYGB）是一種具有抗氧化應(yīng)激作用的珠蛋白，研究顯示CYGB能夠通過抗氧化應(yīng)激來達(dá)到細(xì)胞保護(hù)作用。本文旨在探討人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs）在氧化損傷過程中CYGB的表達(dá)；構(gòu)建CYGB表達(dá)/干擾質(zhì)粒HUVECs模型，研究CYGB在氧化應(yīng)激過程中對(duì)HUVECs的保護(hù)作用并探討可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1、培

2、養(yǎng)HUVECs，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。
　　2、實(shí)驗(yàn)分為4組：對(duì)照組，25μg/ml oxLDL、50μg/ml oxLDL、100μg/ml oxLDL、200μg/ml oxLDL處理組；Western blot檢測(cè)HUVECs在不同濃度oxLDL刺激24h后，細(xì)胞內(nèi)CYGB蛋白的表達(dá)水平；Western blot檢測(cè)HUVECs在100μg/ml oxLDL刺激不同時(shí)間（4、8、12、24h）后，細(xì)胞內(nèi)CYGB蛋白的表達(dá)

3、水平。
　　3、將HUVECs分為4組：對(duì)照組、100μg/ml oxLDL組、100μg/ml oxLDL+CYGB組及100μg/ml oxLDL+CYGB shRNA組，然后觀察在氧化應(yīng)激時(shí)CYGB對(duì)HUVECs的作用。于24h后，檢測(cè)CYGB蛋白水平、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione Peroxidase,GSH-PX）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）、乳酸脫氫酶（Lactic

4、 Dehydrogenase,LDH）的活性以及丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的含量，以及Bcl2和Bax的蛋白水平；
　　4、將HUVECs分為3組：對(duì)照組、100μg/ml oxLDL組、100μg/ml oxLDL+Staurosporine（PKC抑制劑）組。觀察PKC抑制劑在oxLDL誘導(dǎo)HUVECs損傷中的作用。檢測(cè)CYGB蛋白水平、GSH-PX、SOD、LDH、MDA、Bcl2和Bax的蛋白水平。<

5、br>　　結(jié)果:
　　1、倒置顯微鏡下顯示，正常HUVECs呈現(xiàn)典型鋪路石狀態(tài)。
　　2、Western blot結(jié)果顯示：0，25μg/ml oxLDL、50μg/ml oxLDL、100μg/ml oxLDL處理HUVECs24h后，CYGB表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；100μg/ml oxLDL處理 HUVECs4、8、12、24h后，CYGB表達(dá)水平高于對(duì)照組，在24h組CYGB表達(dá)水平最

6、高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、轉(zhuǎn)染CYGB表達(dá)質(zhì)粒后HUVECs中CYGB的表達(dá)明顯增加；轉(zhuǎn)染CYGB干擾質(zhì)粒后HUVECs中CYGB的表達(dá)明顯降低。
　　4、Western blot結(jié)果顯示：100μg/ml oxLDL組和100μg/ml oxLDL+CYGB組中CYGB蛋白表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組，而100μg/ml oxLDL+CYGB shRNA組中CYGB蛋白表達(dá)水平則低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義（P<0.05）。與100μg/ml oxLDL組相比，100μg/ml oxLDL+CYGB組中細(xì)胞SOD、GSH-PX活性顯著提高，Bcl2的表達(dá)也顯著增加（P<0.05），LDH的活性和MDA的含量明顯降低，Bax的表達(dá)明顯降低（P<0.05）；與100μg/ml oxLDL組相比，100μg/ml oxLDL+CYGB shRNA組中細(xì)胞SOD、GSH-PX活性顯著降低，Bcl2的表達(dá)降低（P<0.05），LDH的活性和M

8、DA的含量明顯升高，Bax的表達(dá)增加（P<0.05）。
　　5、Western blot結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組相比，100μg/ml oxLDL組CYGB表達(dá)升高；而與100μg/ml oxLDL組相比，100μg/ml oxLDL+Staurosporine組中CYGB蛋白表達(dá)水平降低（P<0.05）；與100μg/ml oxLDL組相比，100μg/ml oxLDL+Staurosporine組中細(xì)胞SOD、GSH-PX明顯降