血液介導(dǎo)的即刻炎性反應(yīng)(IBMIR)與異綱(羅非魚-小鼠)胰島移植.pdf

1、目的：
　　 1.觀察羅非魚胰島肝內(nèi)移植對糖尿病小鼠的治療作用。
　　 2.觀察羅非魚胰島肝內(nèi)移植與血液介導(dǎo)的即刻炎癥反應(yīng)的關(guān)系。
　　 3.觀察炎性細胞及NK細胞在異綱移植免疫排斥中的作用。
　　 4.探討不同綱動物間胰島細胞移植可行性及免疫排斥機理。
　　 材料和方法：
　　 1.以膠原酶消化法分離羅非魚胰島細胞，再采用手工物理分離法和低速離心法純化胰島。
　　 2.應(yīng)用光學(xué)顯

2、微鏡觀察羅非魚胰島形態(tài)。采用臺盼藍染色法進行胰島活性的鑒定。
　　 3.以鏈脲佐霉素(STZ.Streptozotocin)往小鼠腹腔內(nèi)注射，建立小鼠藥物性糖尿病模型。
　　 4.隨機把糖尿病小鼠分為兩組，即實驗組及對照組。對兩組糖尿病小鼠分別在肝臟內(nèi)注射羅非魚胰島及生理鹽水。于移植后1小時、12小時、24小時和3天觀察小鼠血糖的變化：并在移植后1小時、12小時及24小時分別處死1只受體取鼠的肝臟標本。對移植物進行病理檢

3、查和免疫組化檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1.平均每一條450～550g的羅非魚大約可分離到1～2個直徑為2～5mm左右的胰島，2～3個直徑為0.5～1mm的胰島，8～10個直徑為0.1～0.3mm的胰島，臺盼藍染色法以及雙硫腙.Dithizone，DTZ)染色法顯示胰島的存活率大于90％。
　　 2.移植后受體的血糖檢測：對照組糖尿病小鼠在移植后1h時血糖濃度為(26.06±3.06.mmol/L，觀察期內(nèi)一直呈

4、現(xiàn)出高血糖的持續(xù)狀態(tài)。移植后1h時，移植組的血糖水平有明顯的下降，濃度為(9.34±3.05.mmol/L，與作為對照組相比有顯著性差異(P<0.05)。移植后12h時，實驗組的血糖水平仍有繼續(xù)的下降，濃度為(7.8±2，10.mmol/L，與作為對照組相比有顯著性差異(P<0.05)。但在移植后24h時血糖濃度為(28.13±1.56.mmol/L，與對照組相比無顯著性差異(P>0.05)。
　　 3.組織學(xué)檢測：
　　

5、 實驗組：在移植后12h，病理檢查可見移植物周圍有輕度的炎癥反應(yīng)，有炎癥細胞的聚集，胰島結(jié)構(gòu)仍完整，但在各級血管處可見明顯的凝血反應(yīng)；在移植后24h，小鼠血糖明顯高于正常，肉眼觀可見移植處有明顯機化表現(xiàn)，病理檢查可見移植物周圍有明顯的炎癥細胞浸潤。免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)在移植物周圍有少量的NK細胞浸潤。移植后3d，病理檢查可見移植物周圍可見大量的炎癥細胞浸潤及纖維化表現(xiàn)。從NK-kb免疫組化定量分析發(fā)現(xiàn)在移植后24h時，移植組的OD值為22

6、.33±0.58，與作為對照組相比有顯著性差異(P<0.05)。免疫組化檢查結(jié)果中的陽性面積及OD值隨著時間的推移有逐漸增加的趨勢，這與NK細胞的增加有關(guān)，但在移植后24h有減少的表現(xiàn)。對照組：在移植后1h和24h，病理檢查未發(fā)現(xiàn)移植部位周圍有任何炎癥細胞的聚集。
　　 結(jié)論：
　　 1.膠原酶消化法可作為常規(guī)分離羅非魚胰島的分離純化方法。
　　 2.將羅非魚胰島移植到糖尿病小鼠肝臟內(nèi)，有助于降低糖尿病小鼠的血糖