造影劑腎病發(fā)病機(jī)制中炎性反應(yīng)的探討.pdf

1、目的：通過(guò)觀察TNF-α與NF-κB在CIN模型大鼠腎組織的表達(dá)，研究TNF-α、NF-κB與腎小管間質(zhì)損傷病理評(píng)分、KIM-1之間的關(guān)系，初步探討CIN發(fā)病中是否存在炎性反應(yīng)機(jī)制。
　　方法：取96只雄性SD大鼠，體重約250-350g之間，隨機(jī)分成正常對(duì)照組(n=48)、CIN模型組(n=48)。模型組從尾靜脈注射碘造影劑（76％復(fù)方泛影葡胺注射液）10ml/kg，對(duì)照組用同樣方法給予等量生理鹽水。分別在兩組大鼠注射后6h、1

2、2h、24h、48h、72h、5d、10d、15d時(shí)間點(diǎn)各處死6只，留取血液和腎臟標(biāo)本。血液標(biāo)本用于檢測(cè)Scr、BUN水平。對(duì)留取的腎組織標(biāo)本:1、部分甲醛固定，石蠟包埋，病理切片，用于進(jìn)行腎小管間質(zhì)損傷的病理評(píng)分(HE染色)和觀察腎組織KIM-1、、NF-κB、TNF-α因子的蛋白表達(dá)（免疫組織化學(xué)染色）;2、部分置于RNA保存液，提取組織總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)KIM-1、NF-κB、TNF-α的mR

3、NA在腎臟的表達(dá)情況。根據(jù)對(duì)照時(shí)間點(diǎn)比較兩組大鼠的血清Scr、BUN水平、腎小管間質(zhì)損傷病理評(píng)分和腎組織KIM-1、NF-κB、TNF-α因子和mRNA表達(dá)情況，分析腎組織NF-κB、TNF-α因子的表達(dá)與腎小管間質(zhì)損傷病理評(píng)分、腎組織KIM-1表達(dá)之間的相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)果：⑴血清Scr、BUN水平:對(duì)照組Scr、BUN各時(shí)間點(diǎn)變化不大(p＞0.05); CIN模型組血Scr、BUN水平造模后12h逐漸升高，峰值出現(xiàn)在48h，顯

4、示造模成功。在12h、24h、48h、72h、5d、10d對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，模型組血Scr、BUN水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。⑵腎小管間質(zhì)損傷病理評(píng)分:對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腎臟的腎小管未見明顯損傷，病理評(píng)分無(wú)差異(p＞0.05)。CIN模型組6h即見腎小管損傷，24h、48h見腎小管上皮細(xì)胞刷狀緣脫落、細(xì)胞變性壞死及再生，部分腎小管結(jié)構(gòu)受損，髓質(zhì)區(qū)受損最嚴(yán)重，部分腎間質(zhì)還可見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化形成，72h以后腎小管開始逐漸出現(xiàn)修復(fù)

5、，15d基本恢復(fù)正常。CIN模型組的腎小管間質(zhì)損傷病理評(píng)分顯著高于同一時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組(P＜0.05)。⑶免疫組化及RT-PCR結(jié)果:KIM-1及KIM-1mRNA在造模后6h后就開始大量表達(dá)，在24h達(dá)高峰。NF-κB、NF-κBmRNA、TNF-α及TNF-αmRNA亦在造模后6h后就開始表達(dá)，48h達(dá)高峰。除15d時(shí)間點(diǎn)外，模型組KIM-1、NF-κB、TNF-α、KIM-1mRNA、NF-κBmRNA、TNF-αmRNA的表達(dá)與對(duì)

6、照組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較均有顯著差異(P＜0.05)。⑷NF-κB、TNF-α表達(dá)與腎小管間質(zhì)損傷病理評(píng)分、KIM-1表達(dá)的相關(guān)性:CIN模型組腎小管間質(zhì)損傷病理評(píng)分與NF-κB、TNF-α的蛋白表達(dá)正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.843、0.758(P＜0.05);與NF-κ BmRNA、TNF-αmRNA表達(dá)也呈正相關(guān)(r=0.743、0.707，P＜0.05)。CIN模型組腎組織的NF-κB、TNF-α蛋白表達(dá)與其KIM-1蛋白表達(dá)為正相關(guān)，