抗CD137L抗體對小鼠sGVHD和aGVHD的抑制效應(yīng)rhIL18對小鼠骨髓移植后aGVHD的抑制效應(yīng).pdf

1、目的： 骨髓移植(bone marrow transplantation，BMT)是治療白血病、惡性腫瘤、再生障礙性貧血以及免疫缺陷等疾病的重要手段。根據(jù)骨髓來源的不同，可以將骨髓移植分為自體骨髓移植(autologous BMT)、同基因骨髓移植(syngeneicBMT)、同種異體骨髓移植(allogeneic BMT)。由于自體骨髓移植骨髓來源于自身、同基因骨髓移植的骨髓來自基因型完全相同的個(gè)體，臨床上一般無明顯的排斥反應(yīng)

2、，移植的成功率高，但其缺點(diǎn)是移植后疾病的復(fù)發(fā)率高。同種異體骨髓移植的骨髓來自基因型不同的個(gè)體，移植后常出現(xiàn)嚴(yán)重的并發(fā)癥-移植物抗宿主病(graft versus host disease，GVHD)，使骨髓移植失敗，導(dǎo)致成功率降低，但其優(yōu)點(diǎn)是一旦移植成功，疾病的復(fù)發(fā)率低。 臨床研究發(fā)現(xiàn)，同種異體BMT后發(fā)生GVHD的病人白血病復(fù)發(fā)率明顯低于病情相似但未發(fā)生GVHD的患者，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明GVHD具有抗白血病作用(graft-v

3、ersus-leukemia，GVL)，能降低白血病的復(fù)發(fā)。根據(jù)這些結(jié)果，人們推測自身或同基因型BMT受者白血病復(fù)發(fā)的主要原因之一可能是無GVL作用，因此，如果在自身或同基因型骨髓移植后能誘導(dǎo)適度的GVHD產(chǎn)生GVL將可預(yù)防白血病的復(fù)發(fā)，提高治療效果。Glazier和Bryson等先后用環(huán)孢素A(CsA)短期治療在同基因型骨髓移植的大鼠和小鼠人工誘導(dǎo)出GVHD樣癥狀，稱同基因型GVHD(syngeneic GVHD，SGVHD)，令人們

4、感興趣的是發(fā)現(xiàn)SGVHD同樣具有抗白血病作用。目前，自身骨髓移植后用CsA等藥物短期治療誘導(dǎo)GVHD產(chǎn)生GVL已進(jìn)入臨床試驗(yàn)。但由于SGVHD產(chǎn)生的機(jī)理尚不清楚，臨床上無法控制GVHD發(fā)生的強(qiáng)度，使其應(yīng)用受到限制。我們在前期工作中，對SGVHD發(fā)生免疫機(jī)制進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：SGVHD鼠結(jié)腸IEL 中CD4<'4+>αβT細(xì)胞明顯增高，DNαβT細(xì)胞降低，二者比例失調(diào)；證實(shí)SGVHD鼠結(jié)腸IEL，細(xì)胞Thl類(IL-12、IFN

5、-γ、TNF-α)細(xì)胞因子的表達(dá)升高；證明是CD4<'+>αβT細(xì)胞而不是CD8<'+>T細(xì)胞在SGVHD發(fā)生中發(fā)揮重要作用；同時(shí)發(fā)現(xiàn)協(xié)同刺激分子CD137在SGVHD小鼠結(jié)腸中表達(dá)升高。已知CD137和CD137L是繼CD28和B7之外的另一對重要的T細(xì)胞協(xié)同刺激分子，可依賴或不依賴CD28-B7途徑活化T細(xì)胞，在免疫應(yīng)答、免疫調(diào)節(jié)、腫瘤免疫和自身免疫性疾病的治療等方面發(fā)揮著舉足輕重的作用，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值，但目前有關(guān)CD137

6、協(xié)同刺激通路在SGVHD中的作用尚未見報(bào)道。因此本研究的目的之一是用抗CD137L抗體阻斷CD137-CDl37L信號通路觀察對小鼠SGVHD發(fā)生的影響，為進(jìn)一步闡明SGVHD的發(fā)生機(jī)制提供新的依據(jù)，為防止自身骨髓移植后白血病的復(fù)發(fā)提供新的思路。 GVHD是同種異體骨髓移植的主要并發(fā)癥，嚴(yán)重影響了移植的成功率，防治GVHD成為提高骨髓移植成功率的關(guān)鍵問題。已有的研究證實(shí)，參與GVHD的免疫細(xì)胞主要是T淋巴細(xì)胞，骨髓移植后供者T細(xì)胞

7、在受者同種異型抗原的刺激下，活化、增殖、分化成效應(yīng)性T細(xì)胞，通過釋放各種細(xì)胞因子等機(jī)制引起受者組織器官的病理損傷。因此，阻斷同種異型抗原反應(yīng)性T細(xì)胞的活化、抑制細(xì)胞因子引起的損傷或直接抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的作用成為防治GVHD的重要策略。本研究根據(jù)GVHD的發(fā)病機(jī)制，從抑制T細(xì)胞活化、抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的作用和調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的作用等三方面，探索了防治GVHD的新方法。(1)從抑制T細(xì)胞活化方面，我們根據(jù)T細(xì)胞活化的雙信號理論及我們多年來在CD1

8、37-CD137L協(xié)同刺激通路研究的工作基礎(chǔ)，研究了用抗-CD137L抗體阻斷該通路后對同種異體骨髓移植后GVHD的影響；(2)從抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的作用方面，根據(jù)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory TceⅢ,Treg)研究的最新進(jìn)展，建立了多次輸血體內(nèi)誘導(dǎo)受者特異性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞產(chǎn)生的方法，研究了這種受者特異性Treg對效應(yīng)性T細(xì)胞的抑制效應(yīng)和對GVHD的影響，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探索了輸入受者特異性Treg細(xì)胞和阻斷CDl37協(xié)同刺激通

9、路對GVHD的聯(lián)合抑制效應(yīng)；(3)從細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用方面，根據(jù)細(xì)胞因子研究的新進(jìn)展，在前期研究中利用基因工程的方法，表達(dá)并純化了新近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子IL-18，在本研究中進(jìn)一步研究了該細(xì)胞因子在GVHD的作用(詳見第二部分)。 總之，本部分研究有兩個(gè)目的：一是用抗CDl37L抗體阻斷CDl37-CDl37L信號通路觀察對小鼠SGVHD發(fā)生的影響，為進(jìn)一步闡明SGVHD的發(fā)生機(jī)制提供新的依據(jù)，為防止自身骨髓移植后白血病的復(fù)發(fā)提供新的

10、思路；二是根據(jù)同種異型GVHD的發(fā)病機(jī)制，通過用抗CDl37L抗體阻斷協(xié)同刺激通路抑制T細(xì)胞活化、通過體內(nèi)誘導(dǎo)受者特異性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞來抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的作用及用細(xì)胞因子IL-18抑制GVHD損傷等三方面，探索了防治GVHD的新方法，為提高骨髓移植的成功率提供新的思路。方法 一、抗CDl37L抗體在小鼠SGVHD誘導(dǎo)中作用的研究 (一)小鼠SGVHD模型的誘導(dǎo) 用致死量的X射線照射受體小鼠，4-6h內(nèi)移植去Thy．

11、1<'+>T細(xì)胞的同基因型骨髓，從移植的當(dāng)天開始用CsA治療，連續(xù)21d。 (二)SGVHD的評估 停用CsA后，每周稱重小鼠3次，并觀察SGVHD的臨床癥狀(體重降低、腹瀉等)。取小鼠的肝臟和結(jié)腸常規(guī)制備組織切片并用H-E進(jìn)行染色，然后采用雙盲法由病理學(xué)家對所有的病理切片進(jìn)行觀察，并根據(jù)公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)對SGVHD進(jìn)行分級。RT-PCR法檢測小鼠肝臟和結(jié)腸組織中CDl37mRNA和細(xì)胞因子IL-12，IFN-γ，TNF-α

12、 mRNA水平。 (三)抗CDl37L抗體治療 在模型建立的基礎(chǔ)上，于移植后10d給抗體干預(yù)組小鼠腹腔注射抗CDl37L抗體進(jìn)行干預(yù)治療，每周三次，每次200μg，連續(xù)三周。然后按照上述標(biāo)準(zhǔn)觀察SGVHD的發(fā)生情況。 二、抗CDl37L抗體及其聯(lián)合Treg抑制小鼠aGVHD的研究 (一)抗CDl37L抗體體外對T細(xì)胞增殖的影響 以C57BL/6小鼠脾臟細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞，以BALB/c小鼠脾臟細(xì)胞作

13、 為刺激細(xì)胞進(jìn)行體外混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，在該反應(yīng)體系中加入不同濃度的抗CD137L抗體，觀察抗CD137L抗體體外對T細(xì)胞增殖的影響；同時(shí)收 集培養(yǎng)上清液，用ELISA法檢測上清夜中細(xì)胞因子IL-2的濃度。 (二)Treg的體內(nèi)誘導(dǎo) 乙醚麻醉BALB/c小鼠，無菌操作從頸靜脈采取血液，肝素防凝。然后，通過尾靜脈將肝素防凝全血輸入到供體小鼠C57BL/6體內(nèi)，輸入量為0.25ml。這種輸血稱為受者特異性輸血(recipi

14、ent specitic transfusion,RST)。每周輸注一次，連續(xù)五次。部分小鼠輸血一次或三次。所有接受輸血的小鼠均于最后一次輸血后七天處死進(jìn)行以下檢測：1、流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾臟細(xì)胞表型 分離受血者小鼠脾臟細(xì)胞，將脾臟細(xì)胞懸浮在PBS緩沖液中，分別用．PE、PE-Cy-5標(biāo)記的特異性抗體(CD25、CD4)進(jìn)行雙色標(biāo)記。用流式細(xì)胞儀測定、分析細(xì)胞的表型。 2、RT-PCR檢測Foxp3mRNA和TGF-βmRNA

15、 用Trizol試劑抽提脾細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，分別用β-actin、Foxp3和TGF-β的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物特異性條帶的OD除以來自同一組織的p-actin的OD值使其標(biāo)準(zhǔn)化后比較各自的變化。 3、Treg細(xì)胞對混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的影響 利用單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測上述含有Treg細(xì)胞的脾臟細(xì)胞對同種異型抗原的反應(yīng)程度，并檢測輸血次數(shù)對體外T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。 (三)小鼠aGVHD的建立

16、 1.制備供體鼠骨髓細(xì)胞和脾臟細(xì)胞 頸椎關(guān)節(jié)脫臼處死供體鼠，75％乙醇浸泡10min，無菌操作分離股骨和脛骨并制備骨髓細(xì)胞；無菌操作摘取脾臟，分離脾臟細(xì)胞，兩者混合作為移植細(xì)胞。 2．骨髓移植 受體鼠為BALB/c小鼠，于移植前24h接受9.0Gy的X-射線照射，然后隨機(jī)分為六組：①照射組，②同基因骨髓移植組(稱為對照組)，③同種異基因骨髓移植組(稱為GVHD組)，④同種異基因移植抗CD137L抗體治療組(稱為GVHD

17、+Ab組)，⑤輸血處理的同種異基因骨髓移植組(稱為GVHD+Treg組)，⑥輸血處理的同種異基因移植抗CD137L抗體治療組(稱為GVHD+Treg+Ab組)。通過尾靜脈分別注射不同的骨髓細(xì)胞和脾臟細(xì)胞。 (四)小鼠aGVHD的評價(jià) 根據(jù)參考文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)，由高級實(shí)驗(yàn)師觀察小鼠臨床癥狀，由病理學(xué)專家進(jìn)行組織病理學(xué)評價(jià)。 (五)抗體治療 按照分組要求，分別給予抗體治療組小鼠腹腔注射抗CD137L抗體，隔日一次，連續(xù)10

18、日。 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS10.0軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 一、抗CD137L抗體治療可以抑制小鼠SGVHD的發(fā)生 (一)小鼠SGVHD模型建立 小鼠接受致死劑量(9.0Gy)的X射線照射后4-6h內(nèi)，通過尾靜脈注射同基因骨髓細(xì)胞，并于當(dāng)天腹腔注射環(huán)孢素A(CsA)誘導(dǎo)SGVHD，連續(xù)21d。對照組小鼠均未出現(xiàn)SGVHD，而模型組小鼠SGVHD誘發(fā)率為

19、67％(8/12)。 (二)CD137的檢測 對照組小鼠的結(jié)腸和肝臟組織中CD137 mRNA水平較低或檢測不到；SGVHD小鼠結(jié)腸和肝臟組織中CD137mRNA水平升高，兩組比較P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (三)抗CD137L抗體干預(yù)可降低小鼠SGVHD的誘發(fā) 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，同基因骨髓移植后短期應(yīng)用CsA治療可誘導(dǎo)出SGVHD。于CsA誘導(dǎo)SGVHD的第10天起，腹腔注射抗CD137L抗體，按照

20、模型誘導(dǎo)的觀察指標(biāo)觀察抗體干預(yù)組小鼠的變化，以判斷抗CD137L抗體對小鼠SGVHD的影響。結(jié)果表明，抗CD137L抗體干預(yù)治療可減輕臨床癥狀，如體重下降和腹瀉程度減輕、活動(dòng)力恢復(fù)等；可改善組織病理學(xué)改變，如小鼠結(jié)腸和肝臟組織無或僅有散在炎癥細(xì)胞浸潤；抗CD137L抗體可降低小鼠結(jié)腸和肝臟組織中細(xì)胞因子IL-12，IFN-Y，TNF-α和CD137mRNA的水平以及CD137mRNA的水平，與模型組小鼠相比，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

21、0.01)?？笴D137L抗體治療組小鼠SGVHD的誘發(fā)率為25％(3/12)，與模型組小鼠67％(8/12)的SGVHD誘發(fā)率相比，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。二、抗CDl37[?？贵w及其聯(lián)合’rreg細(xì)胞抑制小鼠aGVHD的發(fā)生(一)抗CDl371?？贵w對體外T細(xì)胞增殖的影響 1．抗CDl37[?？贵w在體外可抑制混合淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng) 在單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中，加入不同濃度的抗CDl37L抗體進(jìn)行培養(yǎng)。結(jié)果顯示，第5天時(shí)，對照組

22、中的細(xì)胞集落增大，而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞集落的擴(kuò)增受到不同程度地抑制。<'3>H-TdR摻入實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，第5天時(shí)lμg/ml、2.5μg/ml和5μg/ml抗CDl37L抗體可見抑制作用，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析未見顯著性差異；而10μg/ml抗CDl37L抗體則可表現(xiàn)出明顯抑制作用，并且隨著濃度的增加，其抑制作用不斷增強(qiáng)，細(xì)胞集落的增長受到明顯抑制，與對照組相比，P<0.05。 2．抗CDl37IL抗體在體外可抑制細(xì)胞因子IL-2的產(chǎn)生 用ELI

23、SA測定上清液中IL-2的濃度顯示，5d時(shí)，濃度為1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml抗CDl37L抗體組的上清液中IL-2的表達(dá)量與對照組表達(dá)量未見明顯差異，而濃度為10μg/ml、20μg/ml抗-CDl37L抗體組的上清液中IL-2的表達(dá)量較對照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。 (二)抗CDl37L抗體治療對小鼠aGVHD的影響 1．抗CDl37L抗體治療對小鼠生存時(shí)間的影響 小鼠接受

24、致死劑量X射線照射后進(jìn)行骨髓移植，GVHD組小鼠僅存活14天，GVHD抗體治療組小鼠則有2/5存活超過26天。 2．抗體治療對小鼠aGVHD臨床癥狀的改變 小鼠接受異基因骨髓移植后，由于供體T細(xì)胞識別受者細(xì)胞上的同種異型抗原而活化，引起受體鼠出現(xiàn)一系列GVHD臨床癥狀，主要包括體重下降、弓背、翹毛、腹瀉和活動(dòng)力下降。而抗CDl37L抗體治療組小鼠體重下降和腹瀉程度減輕，活動(dòng)力有所恢復(fù)等。 3．抗體治療可以減輕

25、小鼠結(jié)腸和肝臟組織病理學(xué)變化 H-E染色顯示，GVHD模型小鼠的病理改變主要表現(xiàn)為：結(jié)腸組織腺上皮細(xì)胞死亡、脫落，腺體減少，炎細(xì)胞浸潤，以及結(jié)腸粘膜潰瘍形成、粘膜壞死脫落；肝臟組織中門靜脈擴(kuò)張、淤血，膽管周圍淋巴細(xì)胞浸潤，膽管上皮細(xì)胞死亡、脫落，血管內(nèi)皮細(xì)胞炎，實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡等病變。而用抗CDl37L抗體治療后，上述病理變化可明顯減輕，肝臟組織中門脈擴(kuò)張和淤血現(xiàn)象減輕、匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤減少等。說明抗CDl37L抗體治療可以明顯

26、改善同種異基因骨髓移植受體鼠的病理改變。 (三)Treg細(xì)胞的體內(nèi)誘導(dǎo)及其對aGVHD的影響 1．Treg細(xì)胞的體內(nèi)誘導(dǎo) 小鼠接受不同次數(shù)輸血后可發(fā)生如下變化： (1)小鼠脾臟細(xì)胞CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞比例升高流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，正常情況下小鼠脾臟細(xì)胞中含有一定比例的Treg細(xì)胞，大約為7.2％。輸血之后，小鼠脾臟中CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞所占CD4<'+>T細(xì)胞的比例有所增加，

27、于輸血1、3、5次后，脾臟中CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞的比例由正常時(shí)的7.2％分別升高為8.4％(P>0.05)、9.8％(P<0.01)和10.2％(P<0.01)。 (2)小鼠脾臟細(xì)胞Foxp3 mRNA的表達(dá)增加 RT-PCR顯示，正常小鼠脾臟細(xì)胞表達(dá)低水平Foxp3mRNA，而經(jīng)過輸血后，小鼠脾臟細(xì)胞內(nèi)Foxp3mRNA的表達(dá)水平升高，輸血1次、3次和5次后Foxp3mRNA的水平分別是正常小鼠脾細(xì)胞的1.3

28、(P>0.05)、2.5(P<0.01)和3(P<0.01)倍左右。 (3)小鼠混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)降低 以輸血處理的C57BL/6小鼠脾臟細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞，以絲裂霉素處理的BALB/c小鼠脾臟細(xì)胞為刺激細(xì)胞，混合培養(yǎng)5天后，輸血1次小鼠脾臟細(xì)胞增殖反應(yīng)降低，但與正常小鼠對比未見明顯差異，輸血3次和5次后，小鼠脾細(xì)胞的增殖反應(yīng)程度顯著低下，與正常小鼠脾細(xì)胞相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 2．Treg細(xì)胞對a

29、GVHD的影響 以輸血3次和5次的含有Treg細(xì)胞的小鼠骨髓細(xì)胞和脾臟細(xì)胞進(jìn)行骨髓移植，結(jié)果顯示：GVHD+Treg組小鼠第14天開始死亡，26天時(shí)的存活率為25％(1/4)，而GVHD組小鼠接受供體小鼠的骨髓細(xì)胞和脾臟細(xì)胞后僅存活14天，說明Treg細(xì)胞可以延長小鼠的短期存活時(shí)間；臨床癥狀積分表明，GvHD+Treg組小鼠體重下降和腹瀉程度減低，翹毛減少，活動(dòng)力有所增加，因此癥狀積分明顯低于GVHD組小鼠的積分；組織病理檢查發(fā)

30、現(xiàn)，肝臟組織門脈擴(kuò)張和淤血減輕，匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤減少；結(jié)腸組織腺上皮細(xì)胞壞死和脫落較輕，腺體結(jié)構(gòu)大致正常，固有層炎細(xì)胞浸潤減少等。說明Treg細(xì)胞可以改善同種異基因骨髓移植后GVHD癥狀，有助于免疫耐受的建立，但單獨(dú)使用效果并不理想。 (四)抗CD137L抗體聯(lián)合體內(nèi)誘導(dǎo)的Treg細(xì)胞對aGVHD的影響 雖然上述試驗(yàn)證明單獨(dú)使用抗CDl37L抗體或Treg細(xì)胞對GVHD的預(yù)防有一定的作用，但并不十分理想，因此進(jìn)一步探討抗

31、CDl37L抗體聯(lián)合體內(nèi)誘導(dǎo)的Treg細(xì)胞對GVHD的影響非常有必要。利用含有Treg細(xì)胞的輸血小鼠骨髓細(xì)胞和脾臟細(xì)胞進(jìn)行骨髓移植，移植后當(dāng)天給受體鼠腹腔注射抗CDl37L抗體，每只每次200μg，隔天注射一次，連續(xù)注射10次，然后觀察小鼠臨床癥狀、生存時(shí)間，并進(jìn)行組織學(xué)檢查。結(jié)果顯示，GVHD+Treg+Ab組小鼠于20天時(shí)開始死亡，26天時(shí)的存活率為66％(4/6)，顯著高于GVHD組小鼠、GVHD+Ab組小鼠和GVHD+Treg

32、組小鼠。其臨床癥狀積分較GVHD組小鼠明顯降低，表現(xiàn)為體重下降和腹瀉均減輕，活動(dòng)較為活潑，無弓背和翹毛現(xiàn)象等。組織病理學(xué)檢查證實(shí)，GVHD+Treg+Ab組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)正常，匯管區(qū)炎細(xì)胞稀少，但門脈仍有輕微擴(kuò)張；結(jié)腸組織大致結(jié)構(gòu)正常，絨毛和腺體清晰可見，但在固有層仍散在炎細(xì)胞浸潤。說明CDl37L抗體聯(lián)合體內(nèi)誘導(dǎo)的Treg細(xì)胞可顯著減輕同種異基因骨髓移植后受體鼠的臨床癥狀和病理變化，延長受體鼠的短期生存時(shí)間。 結(jié)論和創(chuàng)新性

33、 1．目前有關(guān)CDl37協(xié)同刺激通路在SGVHD中的作用尚未見報(bào)道。本研究在國內(nèi)外首先發(fā)現(xiàn)協(xié)同刺激分子CDl37在SGVHD小鼠結(jié)腸中高表達(dá)，并證明用抗CDl37L抗體阻斷CDl37-CDl37L信號通路，可抑制小鼠SGVHD的病理損傷，為闡明SGVHD的發(fā)生機(jī)制提供新的依據(jù)，為防止自身骨髓移植后白血病復(fù)發(fā)的提供新的思路 2．根據(jù)急性同種異型骨髓移植后GVHD的發(fā)病機(jī)制，從抑制T細(xì)胞活化、抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的作用兩方面

34、探索了防治GVHD的新方法，為aGVHD的免疫治療提供了新的途徑。 (1)根據(jù)T細(xì)胞活化的雙信號理論及我們多年來在CDl37-CDl37L協(xié)同刺激通路研究的工作基礎(chǔ)，在體外證實(shí)用抗CDl37L抗體阻斷CDl37-CDl37L信號通路可明顯抑制混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，抑制IL-2的產(chǎn)生；在體內(nèi)抗CDl37L抗體治療可改善受體鼠aGVHD的癥狀和組織病理變化。為用抗-CDl37抗體治療GVHD提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 (2)從抑制效應(yīng)性T

35、細(xì)胞的作用方面，根據(jù)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory Tcelll,Treg)研究的最新進(jìn)展，創(chuàng)新性建立了多次輸血體內(nèi)誘導(dǎo)受體特異性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞產(chǎn)生的方法，初步研究顯示這種受體特異性Treg可抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的作用、減輕GVHD小鼠的病理損傷、延長小鼠的生存時(shí)間。 (3)在研究阻斷CDl37協(xié)同刺激通路和轉(zhuǎn)輸受體特異性Treg單獨(dú)對GVHD抑制作用的基礎(chǔ)上，首次運(yùn)用抗CDl37L抗體聯(lián)合Treg細(xì)胞干預(yù)GVHD，發(fā)現(xiàn)二者可以