IL-7Rα干預(yù)小鼠異基因骨髓移植后aGVHD的初步研究.pdf

1、目的：
　　 1.利用近交系C57BL/6(H-2b，♂)小鼠作供鼠，SPF級(jí)BALB/C(H-2d，♀)小鼠作受鼠建立異基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)小鼠模型。
　　 2.探討外源性白細(xì)胞介素7受體α（IL-7Rα）與小鼠aGVHD的關(guān)系。
　　 方法：
　　 以BALB/C(H-2d)雌性小鼠為受者，將受鼠分組：?jiǎn)渭冋丈浣M（A組）、照射移植組（B組）、IL-7Rα干預(yù)組（C組），每組1

2、0只，均接受9Gy60Co進(jìn)行全身照射，取C57BL/6(H-2b)雄性供鼠骨髓細(xì)胞1×107個(gè)和脾細(xì)胞2×107個(gè)經(jīng)尾靜脈輸注給受鼠，檢測(cè)以下相關(guān)指標(biāo)的變化：
　　 (1)觀察移植后受鼠的一般狀況、生存時(shí)間；
　　 (2)觀察外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)變化；
　　 (3)常規(guī)組織病理切片，HE染色，顯微鏡下觀察肝臟、皮膚、脾臟及小腸的病理改變；
　　 (4)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)嵌合體形成；
　　 (

3、5)流式細(xì)胞儀分析T細(xì)胞亞群的變化；
　　 (6)Elisa法進(jìn)行細(xì)胞因子IL-7水平的檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 1.建立了穩(wěn)定的小鼠aGVHD模型
　　 (1)不同組小鼠一般狀況、生存期（觀察30天）：A組（單純照射組）小鼠體重持續(xù)下降，逐漸衰竭死亡,30天生存率為0.0％；B組（照射移植組）小鼠+6d體重降至最低，+13d上升，此后再次下降，且出現(xiàn)明顯的aGVHD表現(xiàn),30天生存率為50%;C組（I

4、L-7Rα干預(yù)組）小鼠體重亦于+6d降至最低，此后漸升，+14d達(dá)最高后波動(dòng)于此范圍，并出現(xiàn)倦怠、納差、脫毛、弓背等aGVHD表現(xiàn),30天生存率為63.7%。
　　 (2)外周血白細(xì)胞變化：A組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)于+14d降至最低，且波動(dòng)于此范圍，至+20d全部死亡；B組和C組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)于+7d均降至最低，此后漸升。
　　 (3)aGVHD的病理學(xué)變化：A組小鼠未見(jiàn)aGVHD的病理學(xué)表現(xiàn)；C組小鼠可見(jiàn)輕度的aGVHD病理

5、學(xué)表現(xiàn)；B組小鼠可見(jiàn)明顯的aGVHD的病理學(xué)表現(xiàn)，肝臟可見(jiàn)肝細(xì)胞腫大，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，匯管區(qū)中央靜脈和肝血竇有擴(kuò)張及淤血，肝血竇及匯管區(qū)有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；皮膚結(jié)構(gòu)破壞，毛囊減少，局部可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；脾臟標(biāo)本脾小梁等正常結(jié)構(gòu)破壞，間有巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，脾小體纖維化，脾細(xì)胞減少，部分可見(jiàn)脾竇擴(kuò)張出血；小腸絨毛壞死脫落，腺體減少，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 (4)嵌合體的檢測(cè)：移植后+14天A組未檢測(cè)出Y染色體，未移植，只行照射；B組和

6、C組均有供鼠Y染色體檢出，植入成功。
　　 2.IL-7Rα蛋白對(duì)小鼠aGVHD的影響
　　 (1)兩組小鼠的一般狀況、生存期及生存率比較：C組小鼠生存期長(zhǎng)于B組(P＜0.05),30天生存率高于B組(P＜0.05)為63.7%；該組小鼠倦怠、納差、脫毛、弓背等aGVHD表現(xiàn)輕于B組。
　　 (2)白細(xì)胞計(jì)數(shù)變化：C組和B組小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)均于+7天降到最低值，此后漸上升，C組上升速度快，至+14天達(dá)(4.53±0

7、.21)×109/L，白細(xì)胞恢復(fù)較B組為快(P＜0.05)。
　　 (3)組織病理學(xué)檢查：肝臟、脾、和皮膚的aGVHD組織病理學(xué)改變C組明顯輕于B組，小腸標(biāo)本C組與B組無(wú)明顯差異。
　　 (4)嵌合體檢測(cè)：移植后+14天，C組和B組均有嵌合體檢出，兩組植入都成功。
　　 (5)T細(xì)胞亞群恢復(fù)：移植后C組和B組小鼠T細(xì)胞亞群均紊亂，+21d后漸恢復(fù)，C組恢復(fù)較B組快，+21dCD3+T細(xì)胞計(jì)數(shù)兩組有顯著差異(P＜0