阿米福汀對小鼠異基因骨髓移植后aGVHD的作用研究.pdf

1、本研究共分為二個部分：
　　 第一部分：小鼠異基因骨髓移植aGVHD模型的構建
　　 目的:研究構建小鼠異基因骨髓移植(allo-bone marrow transplantation，allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型的方法，為下步實驗提供理想的實驗動物模型。
　　 方法:以近交系雌性BALB/c小鼠(n=16)作為受鼠，隨機分為三組：空白對照組(a組，n=4)，接受劑量8.5Gy的一次性

2、全身照射(TBI)，之后觀察小鼠骨髓造血功能及其存活時間(OS)；以該照射劑量行TBI，將剩余小鼠分b組(n=6)和c組(n=6)，取雄性C57BL/6 作為供鼠，獲取其骨髓(BM)和脾臟細胞(SCs)并制成細胞懸液，二者(BM ：SCs)以1 ：1和1 ：2的比例混懸，在照射后4～6 h 內經尾靜脈將兩組混懸細胞分別輸入b、c組小鼠體內進行移植，觀察受鼠的體重、活動度、有無弓背、豎毛、皮膚潰瘍等情況，HE 染色法觀察肝、腸等組織的病理

3、學變化。
　　 結果:接受8.5Gy 劑量TBI的小鼠中位OS 為15d(13～17d)，骨髓活檢顯示骨髓造血嚴重受抑；移植不同比例混懸細胞的小鼠均出現(xiàn)體重下降、弓背、豎毛和活動度下降等GVHD表現(xiàn)，以c組(骨髓：脾細胞)小鼠aGVHD的表現(xiàn)更為明顯，并出現(xiàn)脫毛、腹瀉，c組小鼠均在移植后30 天內死亡，組織切片HE 染色后可觀察到淋巴細胞浸潤等GVHD 改變。
　　 結論:采取8.5Gy 劑量TBI處理，并行BM和SCs

4、 混懸細胞(BM ：SCs 為1 ：2)輸注可成功構建小鼠異基因骨髓移植后的aGVHD模型。
　　 第二部分：阿米福汀對小鼠異基因骨髓移植后aGVHD的作用研究
　　 目的:研究阿米福汀對小鼠allo-BMT 后aGVHD的發(fā)生是否具有預防作用。
　　 方法:受鼠為近交系雌性BALB/c小鼠(n=42)，將受鼠隨機分為空白對照組(A組，n=6)，移植對照組(B組，n=14)、TBI 前用阿米福汀的移植組(C組，n

5、=16)和移植后用阿米福汀組(D組，n=6)，阿米福汀均為腹腔注射，劑量為0.4 mg/g，小鼠均接受8.5Gy的TBI處理，其后在4-6h 內經尾靜脈給予B、C、D組小鼠輸注雄性供鼠C57BL/6的BM和SCs細胞混懸液。采用PCR檢測技術觀察移植后供鼠造血細胞植入情況；根據(jù)小鼠的GVHD 臨床表現(xiàn)和組織病理學結果評估各組aGVHD的發(fā)生率和嚴重程度；并觀察小鼠移植后的生存時間；采用RT-PCR 方法檢測各組小鼠組織中的IL-1、TN

6、F-α、IL-6、TGF-β、IL-10等細胞因子的表達水平。
　　 結果:從移植小鼠的外周血提取的DNA中均可擴增出供鼠的Sry基因片段。各組GVHD 觀測指標比較：B組小鼠的體重下降、弓背、豎毛和活動度下降等aGVHD表現(xiàn)較C、D組嚴重，并且部分小鼠出現(xiàn)脫毛、皮膚潰瘍；結合組織病理學檢查結果，顯示B組aGVHD的發(fā)生率和嚴重程度高于C和D組；C組小鼠的生存時間長于B組(C組7～90 天，B組14～57天)。B組與C組比較組織