利用兔耳模型研究青蒿琥酯對(duì)瘢痕的抑制效應(yīng).pdf

1、目的：建立更加穩(wěn)定有效的兔耳瘢痕模型，從創(chuàng)傷后創(chuàng)面愈合、瘢痕形成、瘢痕消退，全過程動(dòng)態(tài)觀測(cè)其形態(tài)學(xué)、組織學(xué)及膠原含量的動(dòng)態(tài)變化。利用有效穩(wěn)定的兔耳模型，以形態(tài)學(xué)、瘢痕增生指數(shù)、細(xì)胞增殖活性及膠原纖維合成，觀測(cè)青蒿琥酯對(duì)兔耳創(chuàng)面瘢痕增生的抑制效應(yīng)，為青蒿琥酯在瘢痕防治及藥物臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 方法: ①新西蘭大白兔8只，體質(zhì)量(2.5+0.3)kg，兔耳健全，雌雄不拘，在兔耳腹側(cè)中段制作lcmx lcm大小創(chuàng)面，

2、切除全層皮膚，徹底刮除軟骨膜，每耳6處，共96個(gè)創(chuàng)面。在術(shù)后規(guī)定時(shí)間點(diǎn)分8次切取標(biāo)本，用HE、VG染色光鏡觀察組織學(xué)改變；測(cè)定瘢痕增生指數(shù)(HI)及瘢痕發(fā)生率；氯胺T法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)組織塊中羥脯氨酸(Hydroxyproline-HPr)含量的動(dòng)態(tài)變化。 ②新西蘭大白兔16只，體質(zhì)量(2.5±0.3)kg，兔耳健全，雌雄不拘，用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組：A組(對(duì)照組)、B組(青蒿琥酯40g/l組)、C組(青蒿琥酯80g/l組)和D組

3、(青蒿琥酯120g/l組)，每組4只。在兔耳腹側(cè)中段制作1cm×1cm大小創(chuàng)面，每耳6處，共192個(gè)創(chuàng)面。術(shù)后第6d，開始向創(chuàng)面基底部及創(chuàng)面灶內(nèi)局部注射NaHC03或不同濃度的青蒿琥酯，20μl/創(chuàng)面，每3d注射1次，共6次。A組注射50g/l NaHC03：B、C、D組分別注射濃度為40g/l、80g/l和120g/l的青蒿琥酯。在術(shù)后第28d和56d，分2次切取標(biāo)本，用HE、VG染色光鏡觀察組織學(xué)改變：測(cè)定HI；氯胺T法檢測(cè)瘢痕組織

4、中HPr的含量變化；免疫組化、蛋白免疫印跡(Western blotting，WB)法檢測(cè)不同時(shí)期瘢痕組織中增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)及變化情況。 結(jié)果: ①11～14d可見成纖維細(xì)胞和膠原纖維增多，18d可見瘢痕增生明顯，術(shù)后第28d增生達(dá)到高峰，第56 d逐漸進(jìn)入消退期，可持續(xù)3～4個(gè)月。術(shù)后第28d瘢痕發(fā)生率高達(dá)91.7％，術(shù)后第56d仍維持在較高水平。 ②HE、VG染色顯示，青蒿琥酯組真皮層變薄，成

5、纖維細(xì)胞數(shù)量較少，膠原纖維排列規(guī)則，無膠原結(jié)節(jié)或者膠原結(jié)節(jié)不明顯。而對(duì)照組真皮層較厚，成纖維細(xì)胞密集，膠原纖維排列紊亂或成旋渦狀，形成膠原結(jié)節(jié)。局部注射青蒿琥酯可降低兔耳瘢痕HI、HPr含量、PCNA素達(dá)強(qiáng)度及蛋白表達(dá)量，與對(duì)照組相比，差異均有顯著性(P＜0.05).組間比較，差異也均有顯著性(P＜0.05)。 結(jié)論: 1.保留軟骨，切除全層皮膚并刮除軟骨膜后兔耳創(chuàng)面能產(chǎn)生有效穩(wěn)定的增生性瘢痕，可以用作動(dòng)態(tài)的研究藥物防治