ATRA協(xié)同BCNU靶向抑制人腦腫瘤干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文ATRA協(xié)同BCNU靶向抑制人腦腫瘤干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究姓名：羅湘穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)（神經(jīng)外科學(xué)）指導(dǎo)教師：方加勝20070501博士論文中文摘要用免疫磁珠法分離CDl33陽(yáng)性和陰性細(xì)胞以純化BTSC以及用CDl33陽(yáng)性和陰性細(xì)胞分別腦內(nèi)移植接種BALB／cnu裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證BTSC的致瘤能力；通過(guò)BTSC在含血清培養(yǎng)基中貼壁分化后，再次轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)條件下的去分化觀察BTSC的去分化特性。第二章主要通過(guò)

2、單克隆形成實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)觀察ATRA協(xié)同BCNU在體外抑帶t]BTSC的增殖：利用AO／EB雙熒光染色法定性觀察ATRA協(xié)同BCNU體外抑制BTSC過(guò)程中的凋亡現(xiàn)象并利用流式細(xì)胞術(shù)定量測(cè)定了凋亡比例；通過(guò)半定量RTPCR實(shí)驗(yàn)研究ATRA協(xié)同BCNU促BTSC凋亡的分子機(jī)制，在上述實(shí)驗(yàn)中均設(shè)置對(duì)照組并做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3結(jié)果第一章結(jié)果表明，利用本研究使用的培養(yǎng)方法可以從本組全部34例較高級(jí)別星型細(xì)胞膠質(zhì)瘤病例中分離培養(yǎng)出BTSC；BTSC具

3、有無(wú)限擴(kuò)增和自我更新能力，表達(dá)CDl33和Nestin；在撤除生長(zhǎng)因子并添加胎牛血清的培養(yǎng)環(huán)境中BTSC發(fā)生貼壁分化，分化腫瘤細(xì)胞可以具有神經(jīng)元(NeuN)、星形膠質(zhì)細(xì)胞(GFAP)、少突膠質(zhì)細(xì)胞(CNPase)的表型，R口BTSC具有多向分化能力；利用免疫磁珠細(xì)胞分離技術(shù)可以獲得純度很高的、具有體外增殖和體內(nèi)致瘤能力的BTSC，可以在裸鼠腦內(nèi)導(dǎo)致腫瘤發(fā)生；BTSC在含血清培養(yǎng)基中貼壁分化后，再次轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)條件下具有去分化特性。第二

4、章結(jié)果表明，ATRA協(xié)同BCNU在體外較單獨(dú)應(yīng)用BCNU更能抑制BTSC的增殖，削弱BTSC的自我更新能力；在ATRA協(xié)同BCNU體外抑制BTSC過(guò)程中有凋亡現(xiàn)象，凋亡比例比單獨(dú)應(yīng)用BCNU有顯著提高；通過(guò)半定量RTPCR實(shí)驗(yàn)證實(shí)ATRA協(xié)同BCNU促BTSC凋亡的分子機(jī)制之一為Survivin基因的下調(diào)。4結(jié)論膠質(zhì)瘤的腫瘤組織中存在具有無(wú)限擴(kuò)增能力的BTSC；可以利用添加EGF和bFGF的無(wú)血清培養(yǎng)基和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)方法成功分離培養(yǎng)BT

5、SC；BTSC可以在這種體外培養(yǎng)環(huán)境中增殖形成單克隆性腦腫瘤干細(xì)胞球；BTSC可以分化產(chǎn)生具有多種成熟神經(jīng)細(xì)胞表型的分化腫瘤細(xì)胞；可以初步確定CDl33為BTSC的特異性標(biāo)志物；BTSC可以在裸鼠腦內(nèi)導(dǎo)致腫瘤發(fā)生；BTSC具有去分化特性。ATRA協(xié)同BCNU在體外較單獨(dú)應(yīng)用BCNU更能抑St]BTSC的增殖以及削弱BTSC的自我更新能力；在ATRA協(xié)同BCNU體外抑St]BTSC過(guò)程中存在凋亡，凋亡比例比單獨(dú)應(yīng)用BCNU有顯著提高，其分