VEGF對人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞定向遷移及增值的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞分離、培養(yǎng)并鑒定的方法;觀察血管內(nèi)皮生長因子VEGF對人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞的定向遷移及增值的影響。
　　方法：采用CD133標(biāo)記的磁珠分選法從人腦星形膠質(zhì)瘤組織中分離出腦星形膠質(zhì)瘤CD133+細(xì)胞,神經(jīng)干細(xì)胞球無血清培養(yǎng)法進(jìn)行分選后細(xì)胞培養(yǎng),應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光染色對腫瘤球細(xì)胞及其分化細(xì)胞進(jìn)行鑒定,并進(jìn)行裸鼠體內(nèi)荷瘤實(shí)驗(yàn)。免疫熒光染色檢測血管內(nèi)皮生長因子受體VEGFR在人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞中的

2、表達(dá)。免疫印跡法檢測VEGF在人腦惡性星形膠質(zhì)瘤與正常腦組織中的蛋白表達(dá)。Transwell轉(zhuǎn)移模型評價(jià)VEGF對人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞的遷移影響。CCK8法檢測VEGF對人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果：成功培養(yǎng)出人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞球,具有較強(qiáng)的單細(xì)胞克隆增殖能力,檢測干細(xì)胞標(biāo)記物CD133,Nestin陽性,分化后細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元β-tubulinⅢ和星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP特異性抗原,裸鼠體內(nèi)荷瘤實(shí)驗(yàn)成功種植出

3、腫瘤;免疫熒光組織化學(xué)法檢測到人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞VEGFR分選后表達(dá)明顯多于分選前表達(dá)。免疫印跡法檢測人腦惡性星形膠質(zhì)瘤VEGF表達(dá)明顯高于正常腦組織。Transwell體外細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞能順VEGF濃度差定向遷移,且這一作用可被VEGF受體抑制劑所拮抗。VEGF能促進(jìn)人腦星形膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞在無血清環(huán)境中的增殖。
　　結(jié)論：VEGFR在CD133陽性腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),VEGF在人腦惡性星形膠質(zhì)瘤