免疫磁珠法分離、培養(yǎng)人腦膠質瘤干細胞.pdf

1、目的：建立免疫磁珠法分離并培養(yǎng)人腦膠質瘤干細胞的方法。 方法：將術中取得的腦膠質瘤標本，在嚴格無菌的條件下，去除血管及壞死的腫瘤組織，通過反復剪切、消化和吹打成單細胞懸液，200 目篩網過濾，免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133+細胞，用神經干細胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細胞克隆能力的細胞球，取第3代進行誘導分化，分化前、后分別用免疫細胞熒光化學方法鑒定腫瘤干細胞及分化后細胞。 結果：免疫磁珠分選出的CD133+細胞，可懸

2、浮生長并形成神經干細胞樣細胞球，有較強的增殖能力，膠質瘤干細胞標志物nestin、CD133 陽性，并具有腫瘤的核型，分化后細胞表達神經元β-tubulin 3和星形膠質細胞GFAP 特異性抗原,而nestin、CD133陰性。 結論：免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細胞混雜生長的發(fā)生，能夠從大量腫瘤細胞中分離出只占極少比例的腫瘤干細胞，細胞結合磁珠后其生物學特性未受到明顯的影響，在體外可以長期培養(yǎng)和傳代，進一步證實了腫瘤干細