人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞源性外泌體的分離與提純研究.pdf

1、目的：體外培養(yǎng) U251細(xì)胞，分別利用差速離心法和試劑盒兩種方法分離、提純exosome，證明分離提純的物質(zhì)為exosome，并對兩種方法進(jìn)行優(yōu)缺點(diǎn)比較。
　　方法：體外培養(yǎng) U251細(xì)胞，觀察細(xì)胞貼壁生長良好后，將培養(yǎng)基更換為不添加小牛血清的培養(yǎng)基，1周后將細(xì)胞培養(yǎng)上清液分兩組進(jìn)行收集，分別以差速離心法、試劑盒提純exosome。然后在電子顯微鏡下通過液相載網(wǎng)法觀察形態(tài)，并照相，確認(rèn)exosome存在，對比兩組的形態(tài)結(jié)構(gòu)，記錄直

2、徑大小，并對兩種方法進(jìn)行比較。
　　結(jié)果：U251細(xì)胞可以分泌exosome，exosome小囊泡均能夠在差速離心法和試劑盒兩種方法下提取到。通過差速離心機(jī)進(jìn)行差速離心提取的 exosome與試劑盒提取的exosome結(jié)構(gòu)相同，電鏡結(jié)構(gòu)為小囊泡狀，表現(xiàn)為球體、橢球體，中央為低密度區(qū)，周圍深染。兩組測量直徑均在35～160nm之間，差速離心法組測量直徑均值為99.33±4.21nm，試劑盒組測量直徑均值為98.08±4.13nm，經(jīng)