穿膜肽聯(lián)合鹽霉素磷脂膠束靶向腫瘤干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、在腫瘤中不僅存在著普通腫瘤細(xì)胞，還存在著與腫瘤發(fā)生，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切的腫瘤干細(xì)胞，它是原始腫瘤細(xì)胞[1]。因此，成功清除腫瘤干細(xì)胞對(duì)腫瘤治療起著重要作用。眾多癌癥中，肝癌是目前最常見(jiàn)惡性腫瘤之一，過(guò)去三十年中，在美國(guó)肝癌發(fā)病率增長(zhǎng)了90％。由于肝癌的擴(kuò)散迅速以及轉(zhuǎn)移率高，五年的肝癌復(fù)發(fā)率從40％上升到70％。近年來(lái)肝癌腫瘤干細(xì)胞的研究開(kāi)始引起人們的注意。眾多研究表明腫瘤干細(xì)胞可以比普通肝癌細(xì)胞更能抵御傳統(tǒng)化療方法。鹽霉素是一種離子載體

2、抗生素，并有報(bào)道其可以清除多種腫瘤干細(xì)胞[2]}。在鹽霉素被廣泛認(rèn)為可以殺傷腫瘤干細(xì)胞的同時(shí)，研究還發(fā)現(xiàn)其對(duì)肝癌和前列腺癌普通細(xì)胞具有很好的殺傷效果。因此，由于鹽霉素能同時(shí)殺傷肝癌細(xì)胞和干細(xì)胞，所以其在肝癌治療上具有很強(qiáng)的應(yīng)用前景[3-5]。
　　本研究論文的研究?jī)?nèi)容如下:
　　第一章，建立了可靠的SAL檢測(cè)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SAL濃度在7.82～1000μg·mL-1范圍內(nèi)與樣品峰面積A呈良好相關(guān)性(r=0.999)，直

3、線回歸方程:A=940.43C+16584。高、中、低三個(gè)濃度日內(nèi)精密度和日間精密度RSD均小于5％，滿足體外檢測(cè)要求。
　　第二章，通過(guò)偶聯(lián)法將-iRGD中巰基與DSPE-PEG2000-MAI中馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)生成DSPE-PEG2000-iRGD，通過(guò)MALDI-TOF-MS鑒定DSPE-PEG2000-iRGD的成功合成?？疾炝薉SPE-PEG2000-iRGD膠束的粒徑，zeta電位和形態(tài)結(jié)構(gòu)，并優(yōu)化了膠束的制備條件。結(jié)果

4、表明藥物與材料質(zhì)量比為1∶10時(shí)包封率較好(96.64％)，粒徑較小(13nm左右)。M-SAL-iRGD在pH=5.0和pH7.4的條件下，SAL均呈兩相釋放，在pH=5.0條件下釋放較快。
　　第三章，以NRP-1高表達(dá)的HepG2細(xì)胞和HepG2肝癌干細(xì)胞為模型，以1，2-二油?；视?甘油-3-磷酸氨基乙醇-氮-（羧基二乙酸熒光素）(CFPE)為熒光探針穿插在DSPE-PEG2000-iRGD膠束中，考察膠束的體外NRP-

5、1受體靶向性。結(jié)果表明M-CFPE-iRGD膠束在HepG2細(xì)胞和HepG2肝癌干細(xì)胞攝取明顯強(qiáng)于未接穿膜肽的M-CFPE。即M-CFPE-iRGD可以很好的被細(xì)胞攝取的能力。另外，本章還評(píng)價(jià)了兩種膠束細(xì)胞中細(xì)胞毒性，和微球體形成率。結(jié)果表明空白膠束對(duì)肝癌細(xì)胞和肝癌干細(xì)胞均無(wú)毒性，而M-SAL-iRGD可增加對(duì)兩種細(xì)胞的毒性，且可抑制HepG2微球體的形成。
　　第四章，建立了HepG2荷瘤裸鼠模型，制備出包載熒光探針DiR的DS

6、PE-PEG2000-iRGD膠束，評(píng)價(jià)其在體內(nèi)分布和肝癌腫瘤靶向性。結(jié)果表明 M-DiR-iRGD膠束主要分布在肝和腫瘤組織中，并在腫瘤組織中的聚集多于其它組織。說(shuō)明M-DiR-iRGD具有很好的腫瘤靶向與腫瘤滲透性。采用HPLC-MS分析了游離SAL、M-SAL膠束和M-SAL-iRGD膠束在SD大鼠中的藥代動(dòng)力學(xué)特征。結(jié)果表明兩種膠束均可延緩SAL在血漿中的消除，其中M-SAL-iRGD能更有效地延緩SAL從血循環(huán)中的清除，增長(zhǎng)其