抗人ADAM15抗體抑制腫瘤增殖及腫瘤靶向?qū)嶒?yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 去整合素-金屬蛋白酶15(ADAM15，A Disintegrin And Metalloproteinase 15)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種與腫瘤密切相關(guān)的跨膜糖蛋白，本研究探討抗人ADAM15抗體與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合和抑制其增殖的生物學(xué)特性，初步研究其體內(nèi)靶向定位能力。為應(yīng)用抗人ADAM15抗體進(jìn)行惡性腫瘤診斷和治療提供新方法。
　　 方法：
　　 (1)用Protein G免疫親和層析法純化抗人ADAM

2、15多克隆抗體(anti-ADAM15抗體，由江南大學(xué)提供)；
　　 (2)用間接ELISA法檢測在孵育時(shí)間為2、24、48h和抗體濃度為0、2、4、8μg/ml的條件下該抗體與胃癌細(xì)胞株HGC-27、肺癌細(xì)胞株A549以及微血管內(nèi)皮細(xì)胞株HMEC-1的結(jié)合情況；
　　 (3)用MTT法測定該抗體在抗體濃度為4μg/ml而孵育時(shí)間分別為48、72、96h的條件下對上述腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制率；
　　 (

3、4)建立胃癌細(xì)胞株HGC-27荷瘤裸鼠模型，用碘-125標(biāo)記anti-ADAM15抗體并由尾靜脈注射到荷瘤裸鼠體內(nèi)進(jìn)行放射免疫顯像，評價(jià)該抗體在體內(nèi)對腫瘤的靶向定位能力。
　　 結(jié)果：
　　 1．抗體濃度為2～8μg/ml的條件下，anti-ADAM15抗體與三種細(xì)胞株結(jié)合的OD450nm均高于對照組，其結(jié)合程度隨抗體濃度的增高而增強(qiáng)；孵育時(shí)間為24h或48h的結(jié)合程度明顯強(qiáng)于2h。
　　 2．①該抗體在濃度為4

4、μg/ml時(shí)對三種細(xì)胞株的增殖都有一定的抑制作用：當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間為48和72h時(shí)，三種細(xì)胞株增殖測定OD490nm實(shí)驗(yàn)組與對照組相比均有明顯下降；當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間為96h時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞株HMEC-1OD490nm實(shí)驗(yàn)組與對照組相比明顯下降。
　　 ②當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間為48h時(shí)，anti-ADAM15抗體對胃癌HGC-27細(xì)胞及血管內(nèi)皮HMEC-1細(xì)胞增殖抑制率高于肺癌A549細(xì)胞，抑制率分別為(25.74±5.93)％、(23.32±3.

5、70)%、（13.68±4.33）%，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 ③該抗體對胃癌HGC-27細(xì)胞及血管內(nèi)皮HMEC-1細(xì)胞的增殖抑制率在培養(yǎng)時(shí)間為72h時(shí)低于48h，抑制率分別為(14.11±6.25)%和（17.81±4.11）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(HGC-27細(xì)胞組P＜O.O1，HMEC-1細(xì)胞組P＜0.05)。
　　 3.125I-anti-ADAM15抗體標(biāo)記率為(75.16±9.43)%，

6、純化后放射化學(xué)純度可達(dá)(99.44±0.21)%。125I-anti-ADAM15抗體經(jīng)尾靜脈注入荷瘤鼠后，隨時(shí)間延長T/NT逐漸增高，在48h腫瘤清晰顯影，T/NT可達(dá)3.84±0.43。
　　 結(jié)論：
　　 Anti-ADAM15抗體與胃癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞以及微血管內(nèi)皮細(xì)胞均能有效結(jié)合，并且對肺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用，125I-anti-ADAM15抗體在荷胃癌裸鼠體內(nèi)具有腫瘤靶向定位能力