抗體修飾腫瘤細(xì)胞疫苗實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、腫瘤疫苗作為生物療法之一被人們廣泛研究，尤其在防止腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中具有重要價(jià)值。腫瘤細(xì)胞疫苗含有所有的腫瘤相關(guān)抗原，所以至今腫瘤細(xì)胞疫苗仍有不可替代的優(yōu)勢(shì)。為了提高腫瘤疫苗的免疫效果，該課題研究了新型的抗體修飾腫瘤細(xì)胞疫苗。為了進(jìn)行臨床前的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究，我們建立了小鼠模型。通過文獻(xiàn)查閱和抗原抗體結(jié)合空間結(jié)構(gòu)分析，選擇克隆人CD20胞外區(qū)和部分跨膜區(qū)基因與次級(jí)淋巴組織趨化因子信號(hào)肽基因區(qū)域進(jìn)行拼接，構(gòu)建了融合基因真核表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA3f

2、-sig-CD20)。該質(zhì)粒導(dǎo)入B16F10腫瘤細(xì)胞后篩選出穩(wěn)定克隆株，經(jīng)流式細(xì)胞法和熒光顯微鏡驗(yàn)證該細(xì)胞株(B16/CD20)表達(dá)目的蛋白。通過與臨床抗CD20單克隆抗體藥物Rituximab(美羅華)結(jié)合后制備成疫苗，治療同系C57BL/6小鼠人工肺腫瘤轉(zhuǎn)移模型，并對(duì)其抗腫瘤效應(yīng)機(jī)制進(jìn)行了初步探討。此外，應(yīng)用Rituximab修飾人CD20+腫瘤細(xì)胞制備疫苗誘導(dǎo)抗腫瘤特異性T細(xì)胞，并用抗HLA-A0201抗體封閉實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證MHC限制性

3、的殺傷腫瘤作用。 研究結(jié)果顯示，在人工肺轉(zhuǎn)移腫瘤實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中，該疫苗能有效的干預(yù)腫瘤結(jié)節(jié)的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)小鼠生存期，獲得較好的抗腫瘤效果。LDH釋放法測(cè)定表明：該疫苗免疫小鼠后顯著提高了脾淋巴細(xì)胞特異性殺傷腫瘤的能力。CD8+細(xì)胞和NK刪除實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證CD8+T淋巴細(xì)胞在抗腫瘤轉(zhuǎn)移過程中是主要的效應(yīng)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)中我們還觀察到抗體修飾瘤苗不僅能誘導(dǎo)針對(duì)轉(zhuǎn)染了CD20的腫瘤細(xì)胞殺傷反應(yīng)，而且還提高對(duì)野生型黑色素瘤的殺傷效應(yīng)。共聚焦顯微

4、鏡和流式細(xì)胞測(cè)定顯示：抗體修飾瘤苗與DC孵育后能明顯增強(qiáng)DC對(duì)腫瘤細(xì)胞的捕獲率，提示該疫苗通過抗原呈遞細(xì)胞Fc受體途徑增強(qiáng)對(duì)腫瘤抗原捕捉，從而提高了抗原呈遞效果和誘導(dǎo)了特異性抗腫瘤作用。人體外實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)表明：Rituximab修飾人的腫瘤細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)了抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞。HLA-A2抗體封閉實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了該效應(yīng)細(xì)胞是MHC限制性的細(xì)胞毒性T細(xì)胞。我們建立的抗體修飾瘤苗制備方法簡(jiǎn)單，體內(nèi)使用安全有效，抗體用量較少，因此制備成本低廉。此法為臨床