抗腫瘤基因疫苗和相應(yīng)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、惡性腫瘤是當(dāng)今世界嚴(yán)重威脅人類生命健康的致命殺手。隨著人們生活水平的提高，生活習(xí)慣的改變以及環(huán)境污染等因素，導(dǎo)致腫瘤發(fā)病率明顯上升。在當(dāng)前的治療策略中，免疫治療成為新興的研究熱點(diǎn)，腫瘤疫苗成為一種治療惡性腫瘤的重要方法。本研究構(gòu)建了包含人腫瘤抗原survivin和hCG8的兩種真核表達(dá)質(zhì)粒，并獲得了這兩種基因的兩種轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，在本研究中選用了雙順反子真核表達(dá)載體pIRESneo，該載體具有雙基因共表達(dá)的腦心肌炎病毒(ECMV)的內(nèi)部核糖

2、位進(jìn)入位點(diǎn)(IRES)相連處于同一啟動子控制下的腫瘤抗原基因和新霉素抗性基因Neo+，使翻譯過程中核糖體可以從不同位置進(jìn)入而同時(shí)翻譯兩種蛋白質(zhì)。另外，neo基因含有的氨基苷類抗生素(G418)抗性蛋白，經(jīng)過G418篩選，幾乎所有存活的細(xì)胞克隆都能夠表達(dá)所轉(zhuǎn)染的目的基因，這就大大減小了從眾多抗藥克隆中篩選有功能單克隆的必要性，既節(jié)約了時(shí)間又減少了工作量。最終我們獲得了穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞，為建立乳腺癌導(dǎo)向治療動物模型提供研究材料。