HBV X基因及其產物對成人肝細胞HL-7702線粒體結構和功能的影響.pdf

1、目的：研究乙型肝炎病毒(HBV)X基因及其產物HBx與HBx結合蛋白細胞色素C氧化酶Ⅲ(COX Ⅲ)的相互作用及其對線粒體結構和功能的影響。 方法將HBV X基因真核表達載體pcDNA3-X及空載體pcDNA3轉染成人肝細胞HL-7702細胞，經過2周G418篩選，獲得穩(wěn)定表達的新細胞株，分別命名為HL-7702/HBx和H-7702/pcDNA3，RT-PCR和Western blot方法證實HBVx基因在HL-7702/HB

2、x細胞內的穩(wěn)定表達。抽提細胞總RNA進行半定量RT-PCR及分離細胞線粒體進行Western blot檢測COX Ⅲ表達水平變化。通過酶動力學方法檢測線粒體細胞色素氧化酶活性，羅丹明123熒光染色法檢測線粒體跨膜電位及流式細胞術檢測細胞內ROS水平，Western blot方法比較各組細胞NF-κB和c-myc表達水平的差別。 結果：重組質粒pcDNA3-X轉染后經G418篩選，RT-PCR和Western-blot分析結果顯示

3、HL-7702/HBx細胞能夠穩(wěn)定表達HBV X基因。RT-PCR和Western-blot結果發(fā)現(xiàn)HBV X基因下調COX Ⅲ蛋白表達而不影響mRNA水平表達。酶動力學檢測發(fā)現(xiàn)線粒體細胞色素C氧化酶活性降低，同時線粒體跨膜電位也發(fā)現(xiàn)下降，而細胞內ROS水平沒有發(fā)生明顯改變。Western blot結果表明與氧化應激相關的蛋白c-myc表達下調，而NF-κB表達不發(fā)生變化。 結論HBV X基因通過轉錄后水平調節(jié)COX Ⅲ表達，H