慢性氟中毒大鼠肝組織及人肝細胞HL-7702中TRPC5、TRPC6表達意義的研究.pdf

1、目的: 通過研究慢性氟中毒大鼠肝組織及及人肝細胞HL-7702 TRPC5、TRPC6蛋白及其mRNA表達，初步探討TRPC5、TRPC6蛋白在氟中毒肝損傷機制中的作用，為地方性氟中毒肝損傷的診斷、預防和治療提供理論依據(jù)。
　　方法: 36只SD大鼠隨機分為3組，每組12只，組內(nèi)雌雄各半。對照組飲用自來水（含氟F﹣＜0.5 mg／L），低氟組、高氟組分別飲用加氟5mg/L、50 mg/L的自來水。實驗9個月后采用氟離子選擇電極法檢

2、測大鼠尿氟、骨氟含量，股動脈放血處死大鼠并取肝組織-80℃保存；培養(yǎng)人HL-7702肝細胞株，分為對照組、低氟組、高氟組三組，接種到6孔板長滿后，對照組加入普通培養(yǎng)基，低氟、高氟組分別加入含F(xiàn)﹣0.5，5.0 mmol/L的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，于12h、24h、48h分別收集細胞。采用實時熒光定量PCR方法測定大鼠肝組織和人細胞中TRPC5、TRPC6 mRNA表達水平；Western Bolt方法測定肝組織、細胞TRPC5、TRPC6蛋白

3、表達，分析TRPC5、TRPC6在對照組與相應氟中毒大鼠肝組織及人肝細胞中的表達及過量氟對肝臟病變的影響。
　　結果: （1）實驗組大鼠出現(xiàn)不同程度的氟斑牙，且髙氟組重于低氟組；染氟組大鼠尿氟含量高氟組明顯高于低氟組和對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但低氟組與對照組無明顯差異(P>0.05)。骨氟含量低氟組、高氟組與對照組有明顯差異(P＜0.05)，但低氟組與高氟組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)(2)實時熒光定量PCR

4、結果顯示氟中毒組大鼠肝組織TRPC5、TRPC6 mRNA表達明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且隨染氟濃度增加，表達水平增高。（3）人肝細胞對照組、低氟組、高氟組在同一時間點三組兩兩比較，在12h、24h、48h時TRPC5、TRPC6 mRNA表達都具有明顯差異（P＜0.05)；但濃度不變時，TRPC6 mRNA表達在不同時間點沒有明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05)； TRPC5 mRNA對照組在12h、24h、48h時表達無

5、明顯差異（P>0.05)，低氟組12h與24h mRNA表達差異不顯著（P>0.05)，但在48h時出現(xiàn)顯著差異（P＜0.05)，高氟組12h、24h、48h時mRNA表達都具有明顯差異（P＜0.05)（4）Western Bolt測定大鼠肝組織TRPC5、TRPC6蛋白表達水平，結果顯示對照組與低氟組、高氟組比較TRPC5、TRPC6表達水平有顯著差異，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且隨染氟濃度增加，表達水平更高。（5）對照組、低

6、氟組、高氟組從12h時間點人肝細胞TRPC5、TRPC6蛋白表達水平明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義的差異（P＜0.05),但濃度不變時，TRPC6蛋白表達在不同時間點沒有明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05)，TRPC5蛋白對照組在12h、24h、48h時表達無明顯差異（P>0.05)，低氟組12h與24h蛋白表達差異不顯著（P>0.05)，但在48h時出現(xiàn)顯著差異（P＜0.05)，高氟組12h、24h、48h時蛋白表達都具有明顯差異（P＜0.0