鉛對HL-7702細(xì)胞的損傷作用.pdf

1、目的：研究鉛對肝細(xì)胞的損傷作用，并從氧化損傷、細(xì)胞凋亡等途徑初步探討其可能的發(fā)生機(jī)制。 方法：取培養(yǎng)的人肝細(xì)胞株HL-7702細(xì)胞，分別以50、100、200和400μmol/L的醋酸鉛溶液處理24h，作量效分析；100μmol/L劑量組再分別培養(yǎng)6、12、24和48h，作時效分析，以等體積D-Hank's液作對照。各組培養(yǎng)至相應(yīng)時間后，均進(jìn)行如下檢測：①采用HE染色和透射電鏡，觀察肝細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)改變。②以羥胺法測定超氧化

2、物歧化酶活性，以分光光度法測定谷胱甘肽過氧化物酶活性，觀察肝細(xì)胞抗氧化能力的改變；以分光光度法法檢測乳酸脫氫酶活性，觀察細(xì)胞膜損傷情況。③應(yīng)用碘化丙啶染色結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測各周期細(xì)胞比例和細(xì)胞凋亡率。④用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測肝細(xì)胞內(nèi)P53的表達(dá)。 結(jié)果：① HE染色顯示：隨著鉛劑量的增加，細(xì)胞體積逐漸縮小、細(xì)胞皺縮，胞漿和胞核空泡變增多，核膜增厚，細(xì)胞核出現(xiàn)染色質(zhì)嗜堿性增強(qiáng)且出現(xiàn)邊集，核固縮甚至碎裂崩解。隨著鉛作用時間的延長，細(xì)胞

3、大小和密度未見明顯影響，但胞漿和胞核空泡變增多，染色質(zhì)濃聚邊集。②電鏡觀察：50μmol/L組極少數(shù)細(xì)胞有局灶胞膜破裂，部分線粒體嵴消失呈空泡變；400μmol/L組絕大多數(shù)細(xì)胞都有不同程度的變性，胞膜不完整，甚至有少數(shù)細(xì)胞呈裸核狀，線粒體損傷嚴(yán)重。③生化檢測顯示：細(xì)胞上清液中SOD活力和GSH-Px活力呈劑量和時間依賴性降低，而LDH活力呈劑量和時間依賴性升高。④流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)：隨著鉛劑量的增大和作用時間的延長，細(xì)胞凋亡率逐漸增加

4、。細(xì)胞周期分析結(jié)果顯示：50μmol/L組和400μmol/L組各周期細(xì)胞比例與對照比較沒有明顯改變；100μmol/L組G2/M期細(xì)胞比例減少，S期細(xì)胞比例增加；200μmol/L組S期細(xì)胞比例減小，G1期細(xì)胞比例增加。6h組和48h組各周期細(xì)胞比例與對照比較沒有明顯差異；12h組G1期和S期細(xì)胞比例減少，G2/M期細(xì)胞比例增加；24h組G2/M期細(xì)胞比例減少，S期細(xì)胞比例增加。⑤ P53免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示：隨著鉛劑量的增加和作用時