乙型肝炎病毒X蛋白對(duì)HL7702肝細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：
　　1.探討HBx蛋白的穩(wěn)定表達(dá)對(duì)HL7702肝細(xì)胞增殖以及細(xì)胞中COX-2表達(dá)的影響。
　　2.觀察COX-2選擇性抑制劑NS-398對(duì)HL7702/HBx細(xì)胞的影響，探討COX-2在HBx蛋白促進(jìn)肝細(xì)胞增殖中的作用。
　　方法：
　　HL7702/HBx細(xì)胞、HL7702/Mock細(xì)胞、HL7702細(xì)胞分別復(fù)蘇和培養(yǎng)，CCK-8法和克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察和檢測(cè)上述三種細(xì)胞增殖能力；以β-actin為內(nèi)參，運(yùn)

2、用RT-PCR檢測(cè)上述三種細(xì)胞中COX-2在mRNA水平的表達(dá)情況，Western blot檢測(cè)COX-2在蛋白水平的表達(dá)情況；相同濃度COX-2選擇性抑制劑NS398作用體外培養(yǎng)的各組細(xì)胞，并以DMSO組為空白對(duì)照，采用CCK-8法檢測(cè)經(jīng)處理24h、48h、72h后各組細(xì)胞的增殖活性；在50umol/L NS-398作用72h后，以DMSO作為對(duì)照組，Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中COX-2蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：<

3、br>　　細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示：與HL7702/Mock和HL7702兩組細(xì)胞相比較，HL7702/HBx增殖能力更強(qiáng)（P<0.05），克隆形成率也更高（P<0.05）。通過(guò)對(duì)各組細(xì)胞COX-2 mRNA的半定量RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于HL7702/Mock細(xì)胞、HL7702細(xì)胞，轉(zhuǎn)染HBV X基因的HL7702細(xì)胞內(nèi)COX-2的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯增高（P<0.05）。Western blot檢測(cè)示：HL7702/HB

4、x細(xì)胞中的COX-2蛋白相對(duì)表達(dá)水平較高（P<0.05），而HL7702/Mock及HL7702之間則無(wú)明顯差異。NS-398能以時(shí)間依賴(lài)的方式抑制各組細(xì)胞的增殖能力，而在 HL7702/HBx細(xì)胞中增殖抑制率在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)均高于其他兩組細(xì)胞（P<0.05）。經(jīng)50μmol/L NS-398處理后，各組細(xì)胞的COX-2蛋白水平顯著降低，而在HL7702/HBx細(xì)胞中更加明顯（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.HBx蛋白可促