MiR-100參與激活突變SHP-2酪氨酸磷酸酶促進(jìn)砷誘導(dǎo)的MEFs惡性轉(zhuǎn)化.pdf

1、腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，不僅發(fā)病率和死亡率逐年上升，近年來(lái)更呈現(xiàn)出高發(fā)和早發(fā)的趨勢(shì)。而腫瘤的發(fā)生是多因素作用，經(jīng)過(guò)多階段的長(zhǎng)期的復(fù)雜過(guò)程，受環(huán)境因素與基因因素的共同調(diào)控。因此，研究?jī)烧吖餐饔孟履[瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制對(duì)解決腫瘤的高發(fā)和早發(fā)問(wèn)題至關(guān)重要。
　　SHP-2是由PTPN11編碼的非受體型酪氨酸磷酸酶，參與了包括PI3K、MAPK、JAK/STAT等多種信號(hào)通路的活化。最初在努南綜合征中發(fā)現(xiàn)其突變體的存在，后來(lái)在

2、多種血液病及腫瘤中也發(fā)現(xiàn)了這一突變體的存在，并且這一突變體對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著至關(guān)重要的作用。SHP-2最常見(jiàn)的激活突變體是D61G/D61Y，這也是我們一直致力于研究的一個(gè)突變體。
　　砷主要存在于水源和土壤中，是國(guó)際公認(rèn)的的化學(xué)致癌物，與皮膚癌、肺癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)激活突變SHP-2酪氨酸磷酸酶促進(jìn)砷誘導(dǎo)的MEFs惡性轉(zhuǎn)化。在對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探究的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)：As2O3急性處理MEF

3、細(xì)胞48h后,miR-100在As2O3誘導(dǎo)前后的細(xì)胞或SHP2激活突變與否的細(xì)胞出現(xiàn)減少，且受三氧化二砷和SHP2激活突變影響變化一致。
　　MiR-100是小的非編碼RNA，已經(jīng)被報(bào)道在不同腫瘤中通過(guò)靶向不同的靶蛋白而發(fā)揮著致癌基因或是抑癌基因的作用。包括乳腺癌、肺癌、宮頸癌、淋巴瘤在內(nèi)的多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展都與miR-100的異常表達(dá)有關(guān)。但是關(guān)于環(huán)境污染與基因突變共同作用下腫瘤的發(fā)生過(guò)程中miR-100的作用機(jī)制并不明確。我

4、們?cè)O(shè)想miR-100可能參與了激活突變SHP-2酪氨酸磷酸酶促進(jìn)砷誘導(dǎo)的MEFs惡性轉(zhuǎn)化。
　　為了驗(yàn)證這一假說(shuō)，首先，我們采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了SHP-2+/+、SHP-2D61G/+以及其對(duì)應(yīng)的As2O3慢性處理40代的SHP-2+/+-40、SHP-2D61G/+-40細(xì)胞中miR-100的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-100在四種細(xì)胞中的表達(dá)逐漸下降，提示miR-100參與了MEF細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程。接下來(lái)，為了明確miR

5、-100在其中發(fā)揮的效應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-100 inhib itor或miR-100 mimics改變相應(yīng)的MEF細(xì)胞中miR-100的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-100可以減少細(xì)胞的克隆形成能力和非錨定生長(zhǎng)能力以及體外遷移和增殖能力。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)IGF1Rβ和mTOR是miR-100靶基因，WB實(shí)驗(yàn)表明IGF1Rβ在MEFs細(xì)胞中的表達(dá)隨著As2O3誘導(dǎo)SHP-2D61G/+激活突變表達(dá)逐漸升高。最后，采用攜帶有目