氡-α粒子照射致肺支氣管細(xì)胞線粒體損傷及RNA表達(dá)改變.pdf

1、SOOCHOWUNIVERSITY博士學(xué)位論文論文題目氡α粒子照射致肺支氣管細(xì)胞線粒體損傷及RNA表達(dá)改變研究生姓名聶繼華指導(dǎo)教師姓名童建專業(yè)名稱衛(wèi)生毒理學(xué)研究方向放射毒理學(xué)論文提交日期2013年3月氡α粒子照射致肺支氣管細(xì)胞線粒體損傷及粒子照射致肺支氣管細(xì)胞線粒體損傷及RNA表達(dá)改變表達(dá)改變中文摘要中文摘要I中文摘要目的：氡（Rn）是除吸煙外致人類肺癌的第二大危險(xiǎn)因素。氡及其子體對(duì)健康的主要危害在于其發(fā)射的高能量α粒子，吸入體內(nèi)后可對(duì)

2、支氣管和肺細(xì)胞形成高LET照射。線粒體DNA（mtDNA）是致癌物作用的重要靶點(diǎn)。本課題在動(dòng)物和細(xì)胞水平上，研究氡染毒和α粒子照射對(duì)肺組織和支氣管上皮細(xì)胞的損傷效應(yīng)，在建立人支氣管上皮細(xì)胞線粒體DNA敲除模型（ρBEAS2B）的基礎(chǔ)上，觀察照射后細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中線粒體結(jié)構(gòu)和功能的改變，同時(shí)采用高通量芯片技術(shù)，篩選ρ與ρ細(xì)胞間以及α粒子照射前后差異表達(dá)的mRNA和微小RNA（miRNA），為探討線粒體在氡致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依

3、據(jù)。方法：Wistar大鼠置于多功能生態(tài)氡室慢性吸入染毒，累積染毒劑量達(dá)100、200、400工作水平月（WkinglevelmonthWLM）。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行氡染毒和α粒子照射，氡暴露濃度為20000Bqm3，染毒時(shí)間20min次，染毒3d后重復(fù)1次，連續(xù)染毒2次后作為染毒第1代（Rn1），分別染氡10代（Rn10）和30代（Rn30）。α粒子照射劑量為0.1、0.25、0.5和1.0Gy，分二次和四次照射。采用EB法建立人永生化支氣管上

4、皮細(xì)胞（BEAS2B）線粒體DNA部分和完全敲除模型（ρρ0）。RealtimePCR檢測(cè)線粒體DNA拷貝數(shù)變化，流式細(xì)胞儀法檢測(cè)線粒體膜電位、細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平和細(xì)胞周期的改變。通過(guò)血清抗性、細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞錨著獨(dú)立生長(zhǎng)和Transwell膜侵襲試驗(yàn)觀察細(xì)胞的轉(zhuǎn)化情況。采用NimbleGen135KmRNA表達(dá)譜芯片和miRCURYTM芯片篩選差異表達(dá)的mRNA和miRNA，并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果：大鼠氡染毒后