高濃度氧致新生大鼠肺損傷模型中腎臟病理改變及HGF表達(dá)的研究.pdf

1、新生兒尤其是早產(chǎn)兒各臟器發(fā)育不成熟，對(duì)缺血缺氧耐受性差，易出現(xiàn)器官功能受損，臨床使用氧療的機(jī)會(huì)相對(duì)較多，但持續(xù)吸入高濃度氧會(huì)導(dǎo)致不同程度的肺損傷，甚至發(fā)展成慢性肺疾病（CLD）。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)高濃度氧致肺損傷進(jìn)行了廣泛研究，關(guān)于高濃度氧對(duì)視網(wǎng)膜、腦及肝腸組織等器官的損傷也有報(bào)道，但對(duì)腎臟影響的相關(guān)研究少見(jiàn)。國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)持續(xù)高濃度氧暴露致慢性肺損傷時(shí)腎臟病理改變的研究。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）是一種多功能因子，能刺激多種上皮和內(nèi)皮細(xì)胞

2、進(jìn)行有絲分裂、促進(jìn)小管形態(tài)發(fā)生，并具有抗細(xì)胞凋亡的作用，它在腎臟的發(fā)育、急性損傷及再生中具有較強(qiáng)的作用。本研究以足月新生大鼠為研究對(duì)象，建立高濃度氧致新生大鼠肺損傷模型，對(duì)新生大鼠的肺及腎臟進(jìn)行病理觀察，觀察腎組織細(xì)胞凋亡狀態(tài)及HGF表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，探討高濃度氧對(duì)腎臟的損傷及其機(jī)制，以期對(duì)臨床早產(chǎn)兒高濃度氧肺損傷過(guò)程中腎臟損傷的可能及預(yù)防措施提供指導(dǎo)。 第一章持續(xù)高濃度氧暴露對(duì)新生大鼠腎臟病理的影響 目的:觀察持續(xù)吸入高

3、濃度氧對(duì)新生大鼠肺組織及腎臟的病理改變，探討高濃度氧對(duì)新生大鼠肺組織及腎臟的影響。 方法:新生SD大鼠出生后12小時(shí)內(nèi)隨機(jī)分組，分別持續(xù)暴露于90％以上氧（高氧組，HO）和空氣（空氣組，Air）中，于生后3、7、14、21d留取肺組織（左側(cè)）及腎臟（左腎）標(biāo)本。蘇木素-伊紅（HE）染色動(dòng)態(tài)觀察肺組織及腎臟病理學(xué)改變，測(cè)量肺泡面積/肺間隔面積（A/S）及放射狀肺泡計(jì)數(shù)（RAC）：原位末端標(biāo)記法（TUNEL染色法）檢測(cè)腎臟細(xì)胞凋亡指

4、數(shù)（AI）。 結(jié)果:①肺組織HE染色結(jié)果：與Air組比較，3d HO組肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)少許紅細(xì)胞滲出（嗜伊紅樣物質(zhì)）及肺泡間隔炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；7d HO組肺泡腔增大，肺泡壁薄，肺間質(zhì)細(xì)胞增加；14d HO組肺泡腔明顯增大，部分肺泡融合，肺泡數(shù)量減少，肺間質(zhì)細(xì)胞增生；21d HO組正常肺泡結(jié)構(gòu)消失，數(shù)量明顯減少，肺泡腔直徑明顯增大，且大面積肺泡融合，肺泡間隔菲薄，大量間質(zhì)細(xì)胞增生。②腎臟HE染色結(jié)果：與Air組比較，3d HO組腎小球毛

5、細(xì)血管充血，腎小囊腔變窄；7d HO組，腎小球細(xì)胞增生（<25％），系膜細(xì)胞為主，髓質(zhì)毛細(xì)血管增生、充血，見(jiàn)少許間質(zhì)細(xì)胞增生；14dHO組腎小球細(xì)胞增生（>25％，<50％），部分見(jiàn)局灶性玻璃樣變，系膜細(xì)胞增生，髓質(zhì)血管增生，間質(zhì)細(xì)胞增生明顯（>50％），小管上皮細(xì)胞增生；21d HO組皮質(zhì)腎小球細(xì)胞增生明顯，見(jiàn)局灶性玻璃樣變，系膜細(xì)胞增生明顯，可見(jiàn)個(gè)別淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，皮髓質(zhì)交界區(qū)腎小囊腔擴(kuò)張，髓質(zhì)區(qū)腎小管增生，間質(zhì)細(xì)胞增生為主（>75％

6、），有紅細(xì)胞外滲，腎小管細(xì)胞胞核增大，部分見(jiàn)空泡樣變性。③腎臟細(xì)胞凋亡結(jié)果：兩組各日齡組均可見(jiàn)腎臟細(xì)胞凋亡。3d Air組腎臟AI最低。HO組AI從3d起即高于Air組，具有顯著性差異，并隨著日齡的延長(zhǎng)逐漸升高，但21d時(shí)AI有所降低。 結(jié)論:①肺泡發(fā)育障礙是高濃度氧致新生大鼠肺臟損傷的主要病理改變。②腎臟系膜細(xì)胞及腎小管上皮細(xì)胞增生是高濃度氧致新生大鼠肺損傷模型中腎臟的主要病理改變。隨著高濃度氧暴露時(shí)間延長(zhǎng)腎臟損傷逐漸加重。③

7、細(xì)胞凋亡增加可能參與高濃度氧致新生大鼠肺損傷模型中腎臟的損傷發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。 第二章持續(xù)高濃度氧暴露對(duì)新生大鼠腎臟HGF表達(dá)的影響 目的:動(dòng)態(tài)觀察高濃度氧致新生大鼠肺損傷模型中腎組織HGF蛋白表達(dá)的變化，探討HGF表達(dá)變化在高濃度氧致新生大鼠肺損傷模型中腎臟損傷修復(fù)中的意義。 方法:新生SD大鼠出生后12小時(shí)內(nèi)隨機(jī)分組，分別持續(xù)暴露于90％以上氧（高氧組，HO）和空氣（空氣組，Air）中，于生后3、7、14、21

8、d留取腎臟（左腎）標(biāo)本，采用免疫組化法（SABC法）檢測(cè)腎臟組織HGF蛋白表達(dá)。 結(jié)果:①腎臟組織HGF蛋白表達(dá)結(jié)果：各日齡組均有HGF蛋白表達(dá)。Air組腎臟組織HGF蛋白表達(dá)從第3d起隨著日齡的延長(zhǎng)呈逐漸升高趨勢(shì)，但21d時(shí)明顯回落。HO組腎臟組織HGF蛋白表達(dá)從第3d起隨著日齡的延長(zhǎng)逐漸升高，14d達(dá)高峰，21d時(shí)明顯回落。兩組間同一時(shí)間點(diǎn)比較，HO組3d、7d、14d，腎臟組織HGF蛋白表達(dá)顯著增多，其平均值均較相應(yīng)Air